病毒包装

病毒包装应用

病毒包装目的在于将目的基因包装进病毒颗粒,生产具有感染性但没有致病性的工程化病毒。

病毒包装技术在应用上具有以下的特点:

  • 病毒包装技术经历了多年的研究,已趋于成熟,可用于产业化大量生产
  • 病毒基因组的结构简单、分子背景比较清楚,稳定易于改造、易于制备
  • 病毒的宿主范围广,且具有高效的靶向特异性
  • 在目的基因表达方面相对于脂质体介导的基因递送效果更明显、长久、稳定
  • 工程化病毒一般是复制缺陷型的,安全性高
病毒包装的过程(以慢病毒进行RNAi为例)

1. 根据目的基因相关信息,构建打靶目的基因序列shRNA的慢病毒载体;

2. 扩增并制备纯化的shRNA慢病毒载体;

3. 将shRNA慢病毒载体和病毒包装质粒共转染包装细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;

4. 浓缩、纯化病毒液;

5. p24 ELISA法测定慢病毒滴度;

6. 用高质量的病毒液感染宿主细胞;检测基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用抗生素进行稳转细胞株的筛选。通常状况下,筛选的细胞株具有长期的表达稳定性。病毒液足够用于一般的动物活体实验。

资料来源:

https://baike.baidu.com/item/%E7%97%85%E6%AF%92%E5%8C%85%E8%A3%85/