凭借我们在文库构建和筛选方面的专业知识，云舟生物当前可提供基于噬菌体展示技术的VHH抗体（即纳米抗体）发现综合解决方案。利用我们强大的基于序列的筛选技术直接免疫人工养殖羊驼，我们可发现具有卓越治疗潜力的VHH抗体并加以全面的特征检测。
可选择多种类型的抗原用于动物免疫，包括可溶性蛋白、短肽等
在羊驼体内成熟的VHH抗体，保证极强的特异性和结合亲和力
使用多样的噬菌体淘筛策略以及专有的筛选技术以高通量方式量化抗体亲和力
可进行全面的抗体特征检测和功能验证试验
近年来，噬菌体展示技术的使用在抗体发现领域愈发流行。相较于传统杂交瘤技术，该技术具有诸多显著的优势，比如更高的通量以及可筛选不同分子类型抗体的灵活性。单个噬菌体展示文库包含数百万种候选抗体，且可以在单次试验中对它们同时进行检测。这种特点使得该技术成为高效的抗体发现平台。下图展示了基于噬菌体展示技术的抗体发现的典型流程：
选择正确的动物平台和抗原类型对于成功的抗原免疫以及下游候选抗体的发现至关重要。诸如羊驼、美洲驼和骆驼等骆驼科动物是应用于纳米抗体发现的理想动物模型，因为它们可产生天然的仅由两条重链组成的重链抗体。这种抗体的可变区（VHH）能够实现高度特异性的抗原结合。由于VHH的尺寸显著更小且CDR3区域更长，与传统抗体相比具有多种优势，包括更好的抗原识别能力、更高的稳定性与组织穿透能力，并且更易于进行工程改造。云舟生物可直接免疫羊驼，扩大其天然B细胞的免疫组库。
我们可提供多种类型的抗原用于动物免疫。所有由云舟生物制备的抗原均经过严格的质量控制。客户也可自行制备抗原并直接寄送给我们。可溶性蛋白因其易于获取且用量可控通常是首选的免疫原，但当目标抗原为膜结合蛋白或其免疫原性较低时，这类蛋白将不会是优选。这种情况下可考虑使用其它免疫策略，包括使用全细胞、DNA、mRNA、VLP以及病毒形式的抗原进行免疫。
来源于从头合成、天然未免疫或已免疫动物的抗体序列均可用于构建噬菌体展示文库。尽管合成文库和天然文库能够提供广泛的抗体序列多样性，但是抗体的高结合亲和力往往与那些动物免疫后产生的序列相关。抗体序列经过收集后将克隆到噬菌粒载体，然后进行转化和噬菌体组装。对于构建好的噬菌体展示文库，每一个重组噬菌体的表面展示了一种单克隆抗体。我们还提供NGS服务用于验证噬菌体展示文库的均一性和整体质量。
云舟生物开发了一种专有的基于序列的文库筛选方法，可对抗体的亲和力分数进行显著更高通量且无偏倚的测量。经过3-5轮富集后，分数排名靠前的重组噬菌体将采用ELISA或流式细胞术进一步验证其抗体的亲和力。
经过筛选确定后的头部候选抗体会加以表达和纯化以进行全面的特征分析。我们的服务范围涵盖：
图1 向羊驼注射AAV后产生的强免疫反应。每一轮采用血清型混合的AAV（1、2、4、5、8和9）进行免疫，然后收集羊驼血清并使用ELISA滴定抗体。与第二轮（2nd）免疫相比，第三轮（3rd）和第四轮（4th）的免疫显著增加了血清中的抗体滴度。NS：阴性血清。
图2 通过云舟生物基于序列的筛选方法发现了5种符合目标的抗体。（A）为每一个单独的噬菌体克隆计算出其无偏倚的亲和力分值。对比传统筛选方式，我们专有的筛选方法可获得显著更宽的动态范围。（B）所有已发现的抗体对多种血清型的AAV展现出卓越的结合亲和力。每一个候选抗体的结合力都经过了ELISA验证，并且使用pMES4 B4 细菌噬菌体作为阴性对照（NC）。
图3 对anti-AAV VHH抗体的全面特征分析。每个候选抗体以VHH-Fc的形式重新表达。（A）候选抗体的KD值通过BLI测定，结果表明测试的两个VHH抗体具有很高的亲和力。（B）AAV9候选抗体的结合曲线，用于计算EC50值。（C）体外中和试验表明两个VHH抗体均能有效阻碍AAV1感染293T细胞。NC组中无添加任何抗体。IMS：免疫后的小鼠血清；NC：阴性对照。
服务商工作站 >>
