质粒制备

云舟生物平台可满足基因治疗药物研发管线全过程所涉及的载体设计，克隆构建以及生产需求。基于我们革命性的载体在线设计平台和丰富的构建经验，从科学研究到临床药物应用的载体都可以提供优化设计的服务。在质粒DNA生产方面，对于不同下游应用方向（如新药开发研究、临床前研究、临床试验以及商品化生产）我们可以提供不同级别的生产服务。

我们可提供的质粒DNA等级

  • 科研级别质粒

    科研级别质粒适用于基础研究及药物发现研究。此级别质粒在标准的实验室环境下生产，通过严谨的质量控制流程确保客户获得高质量的质粒DNA，以符合各类下游研究的应用。

  • GMP-like质粒

    GMP-like质粒适用于临床前研究阶段，如在动物体内测试药物安全性和代谢的研究。此级别质粒基本按GMP指南关键要求进行生产，生产工艺和质量标准要求均相当，也是在独立受控的生产设施单元内生产，生产过程信息有详细规范的记录，确保可追溯。GMP-like级别可看作是小规模GMP产品的模拟生产，由此价格相较GMP更低，周期也更短。在适当情况下，GMP-like质粒可以在无抗生素、无动物源、无RNA酶的培养体系下进行生产和纯化。每批产品放行都会提供COA。TSE/BSE声明如需亦可提供。

  • GMP质粒

    GMP级别质粒制备要求在经验证符合GMP要求的生产车间内进行生产。整个生产过程严格按全方位的质量保证体系来管控执行。通过全面的过程及批放行检测来确保质粒DNA可以达到乃至超出应符合的质量及安全性要求。产品放行时，我们会提供完整记录生产流程的批放行记录。其他特定记录如需亦可提供。

不同等级的质粒DNA对比

科研级别GMP-like级别GMP级别
应用基础研究应用、新药开发、临床前研究等临床前研究，比如在动物体内的药物安全性测试和代谢测试临床前研究、临床研究以及商品化生产
规格10 ug到100 mg每批次10 mg到1 g每批次可达10 mg到5 g
周期1-8天1-3个月数月到半年
质量规范体系ISO9001适用于GMP体系的ISO9001生产符合ICH质量规范
生产设施在共享的实验室区域中并行生产在分离的单元中生产在经认证的GMP单元中生产
文件控制和可追溯性否是完全可追溯
QC项目与放行浓度、OD260/280、酶切鉴定等根据项目特点按需提供

全套QC检测

根据项目特点进行分析方法开发

无菌灌装N/A按需提供是
保留样本按需提供按需提供是
额外交付内容按需提供COA1. COA
2. 生产概况
3. TSE/BSE声明（按需提供）		1. COA
2. TSE/BSE声明
3. CTD文件
4. 其它文件根据需求提供（BMR等）

GMP质粒DNA的生产流程

云舟生物旨在准时完成生产项目。一个典型的质粒DNA的GMP生产流程如下如：

平台技术

我们可以从至多100 L的发酵体系中每批次获取高达5 g的质粒DNA。制备流程如下图：

质控分析

GMP-like质粒/GMP级别质粒按以下检测项目质控放行。

  • 一般要求/物理特性

    外观、浓度、pH值、可抽取体积、渗透压、分散性

  • 特性鉴定

    酶切鉴定、测序

  • 纯度鉴定
    • OD260/280
    • 质粒超螺旋比率：琼脂糖凝胶电泳、HPLC
    • 蛋白残留：Micro BCA、SDS-PAGE电泳
    • 宿主DNA：qPCR、琼脂糖凝胶电泳
    • 宿主RNA：琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR检测、荧光定量分析
    • 抗生素残留：免疫检测
  • 安全性检测
    • 无菌性检测：直接接种法、薄膜过滤法
    • 内毒素：动态显色法（KCA）

稳定性研究

稳定性研究根据ICH规范要求执行。通过强制降解实验预测光照，温度和pH值等因素对质粒DNA稳定性及纯度、有效性的影响。