SERVICES

腺病毒包装

腺病毒(Adenovirus)载体被用于各种不同类型的哺乳动物细胞的转基因表达。在细胞内,腺病毒基因组保持游离dsDNA形式而不是整合到细胞基因组中。高转导效率、高转基因表达水平使得腺病毒载体成为一种外源基因传递的热门工具,常被用于基因治疗和疫苗生产。我们开发出一系列专有技术和试剂,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺病毒包装工艺水平,对于在我们载体构建服务中用到的第一代腺病毒载体尤其如此。因此,结合我们的线上载体设计平台、线下载体和病毒生产线,我们能持续地提供高质量的定制化腺病毒产品。

阅读我们的腺病毒载体系统的详细介绍 >>
查看我们的腺病毒引用文献 >>
查看我们的腺病毒用户推荐 >>
如何获取腺病毒包装服务?
查看一个腺病毒载体设计实例 >>
查看一个腺病毒服务方案实例 >>
查看设计载体说明 >>
查看下单说明 >>
腺病毒类型

我们提供第一代腺病毒(E1/E3-deleted Ad5)和嵌合型腺病毒(Chimeric adenovirus)包装服务。Ad5病毒的感染是通过病毒颗粒表面的纤突(Fiber)与细胞表面受体CAR(Coxsackie virus and adenovirus receptor)特异性结合而介导的。 并不是所有细胞都高表达CAR,Ad5病毒在某些不表达或者低表达CAR的细胞种类上的应用受限。我们开发了嵌合型腺病毒,它的感染是通过嵌合型纤突(Chimeric fiber)与细胞表面分子CD46特异性结合而介导的。

价格和周期

由于技术上的优势,我们的腺病毒包装具有更高的质量、更⾼效、更实惠。不同规格的腺病毒包装价格和周期如下所示:

规格 推荐使用 滴度 & 体积* 价格 (CNY) 周期**
小规格 细胞培养 >1010 PFU/ml,10x 25 ul,HBSS 缓冲液 ¥3100 20-32天
中规格 细胞培养 >1010 PFU/ml,10x 100 ul,HBSS 缓冲液 ¥4600 20-32天
大规格 细胞培养 >1011 PFU/ml,10x 100 ul,HBSS 缓冲液 ¥7700 20-32天
大规格和超纯化 动物体内 >1012 VP/ml,10x 100 ul,GTS 缓冲液 ¥11600 22-36天

*我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ ITR 到3’ ITR)小于腺病毒承载限度(38.7 kb,~野生型HAd5基因组长度36 kb的108%)的载体。超过该范围,超出的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉,导致包装出来的腺病毒颗粒含有不完整的genome。此外,对于如下载体,我们同样不能保证滴度:

  • 包含对包装过程有不利影响的序列,例如毒性基因(如促凋亡基因);破坏包装细胞或病毒的完整性(如导致细胞聚集的膜蛋白)的基因 ;易于重排或者产生二级结构的序列(如重复序列或者高GC含量序列)。
  • ⽤户提供的载体,因为我们无法控制载体质量。

**周期是指订单接受到发货之间的时间。不包括需要客户提供任何物料(如病毒载体)的等待时间。

交付内容

如果您选择非超纯化腺病毒包装(体外应用级别),如小规格、中规格和大规格,每个订单交付内容如下:

  • 所选规格的定制腺病毒
  • 免费:少量对照病毒*
  • 附加购买(可选): 等量的辅助病毒**

如果您选择超纯化腺病毒包装(体内应用级别),如大规格和超纯化,每个订单交付内容如下:

  • 所选规格的定制腺病毒
  • 附加购买(可选): 等量的对照病毒*
  • 附加购买(可选): 等量的辅助病毒**

* 对照病毒的设计与定制化病毒的生物学应用相匹配,用于转导测试。例如,如果定制化的病毒过表达一个基因,则提供的对照病毒过表达EGFP蛋白;如果定制化病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个scramble shRNA。对照病毒详细信息如下表所示。

** 辅助病毒的设计与定制化病毒的生物学应用相匹配。例如,如果定制化的病毒是一个gRNA腺病毒(只表达gRNA),则需要一个表达Cas9的辅助病毒,才能进行CRISPR编辑实验。

载体系统 对照载体名称 对照载体ID 定制病毒包装规格 对照病毒数量 价格 (CNY)
腺病毒基因表达 pAV[Exp]-
CMV>EGFP
VB150925-10024 小规格 >1010 PFU/ml,100 ul,HBSS缓冲液 免费
中规格 >1010 PFU/ml,2x 100 ul,HBSS缓冲液 免费
大规格 >1010 PFU/ml,2x 100 ul,HBSS缓冲液 免费
大规格和超纯化 >1012 VP/ml,10x 100 ul ,GTS缓冲液 ¥3800
腺病毒shRNA
干扰载体
pAV[shRNA]-
EGFP-U6>
Scramble_shRNA
VB161026-1127kyf 同上 同上 同上
腺病毒miR30- shRNA干扰载体 pAV[miR30]-
CMV>EGFP:
Scramble_
miR30-shRNA
VB180124-1101mjs 同上 同上 同上
腺病毒CRISPR
系统
pAV[Exp]-
CMV>EGFP
VB150925-10024 同上 同上 同上
生产、纯化和滴定

我们常规使用的第一代腺病毒包装系统包括1个含有缺失了E1/E3基因的腺病毒基因组序列的转移质粒(Transfer plasmid)和1个表达E1基因的包装细胞(adenoviral E1-expressing cell line),其包装流程是通过内切酶PacI将携带目的基因(Gene of Interest,简称GOI)的转移质粒线性化。线性化的质粒DNA转染到包装细胞中,由于包装细胞中表达E1基因,E1基因产物激活转移质粒上的腺病毒基因的表达(E3基因的缺失不影响腺病毒的包装),产生重组腺病毒颗粒。 短暂孵育后,收集细胞,裂解细胞释放病毒颗粒。对于超纯化的腺病毒(体内应用级别),需要通过氯化铯(CsCl)密度梯度离心进一步纯化和浓缩。对于非超纯化的腺病毒,我们采用基于免疫化学的方法通过检测腺病毒特异性六连体蛋白(Ad5 hexon protein)来检测病毒滴度。对于超纯化的腺病毒,我们通过测定病毒颗粒的光密度(OD260)测定病毒滴度。

注意:第一代腺病毒包装系统生产腺病毒颗粒时,包装细胞的E1序列与腺病毒基因组序列之间有很低概率的重组,产生有复制活性的病毒(Replication-competent adenovirus,简称RCA)。

质量控制

对于每一个我们生产的腺病毒,质量控制均包括滴度测定(Titer determination)、微生物(细菌和真菌)检测(Bioburden test)、支原体检测(Mycoplasma test)。若转移载体同时编码一个荧光蛋白,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况(Transduction test)。此外,对于超纯化腺病毒,我们还可以检测RCA、内毒素水平(Endotoxin test)和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度(Virus purity test)。

客户提供载体

如需客户提供腺病毒载体,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

问题

常见技术问题请参见常见问题。有关我们产品和服务的其他更多信息,请按照此处联系方式咨询载体家服务团队。