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载体构建
作为全球最大的定制载体服务商，云舟生物可以根据您的实验需求量身定制您的DNA载体。我们拥有超过200种经过优化且适用于各种研究应用的载体系统，均经过体外试验以及部分体内试验验证。使用我们的平台进行载体定制和克隆将显著降低传统实验室DIY载体的时间成本并提高载体构建的效率。
除了DNA载体的分子克隆外，我们还提供多种相关服务如质粒DNA制备、病毒包装（慢病毒、AAV、腺病毒、MMLV、杆状病毒等）、文库构建、BAC突变、点突变、稳转细胞株构建以及RNA制备等。
亮点
- 高度直观的载体设计平台帮助您快速定制您所需要的载体。
- 海量的库存载体骨架和载体元件可选，帮助您快速构建载体（只有～20%的项目需要从头基因合成）。
- 可为载体骨架和载体元件提供可靠的实验数据。
- 灵活的载体克隆的策略，无论是对简单载体还是复杂载体均游刃有余。
- 对于极富挑战性的载体构建项目富有经验。
- 可快速获取下游服务，比如质粒DNA提取和病毒包装。
- 免费载体存储服务达6个月。
- 客户拥有其定制载体的IP。
如何获取载体构建服务？
您可以通过以下方式获取载体克隆服务：
- 您可以免费使用我们的在线载体设计工具来设计自己的载体。该在线工具简单易懂，可以在短短一两分钟内设计好一个载体。请单击主页上的“设计我的载体”按钮来使用该工具，完成设计后，您可以选择将载体的克隆服务添加到购物车中。
- 如果您无法通过我们的在线工具设计您想要的载体，或者需要其他的服务，只需通过点击主页上的“发送设计咨询”按钮在线提交您的需求。我们经验丰富的专家将为您免费设计载体并解答您的需求和疑问。您将收到一封电子邮件，其中有载体设计方案的链接，您可以直接点击链接并将载体的克隆服务添加到购物车中。
- 载体克隆服务的交付形式是包含您定制载体的大肠杆菌储存液。
- 当添加克隆服务到购物车时，您还可以添加下游服务，如病毒包装或质粒DNA提取等。
- 您可以将购物车中的物品按照说明进行下单。
价格和周期
云舟生物将以超低价和快周期为您提供高效、专业的载体构建服务。我们的克隆服务价格比您自己制备克隆所需的试剂成本更低，可以为您节省时间和精力。所有定制的载体都经过严格的质量控制，以确保交付的载体符合您的设计要求。最终交付形式是包含目的载体的大肠杆菌。价格和周期请参考以下表格。
常规载体构建服务
由云舟生物提供的标准化骨架和标准化元件进行载体构建。
常规载体的价格和周期如下：
| 服务类型 | 价格 (CNY) | 周期* |
| shRNA载体构建 | ￥880起 | 7-12 天 |
| gRNA载体（单gRNA）构建 | ￥880起 | 6-18 天 |
| gRNA载体（双gRNA）构建 | ￥2,180起 | 10-20 天 |
| 表达载体构建 | ￥880起 | 7-18 天 |
* 周期的定义：从接受订单到发货的时间，不包括客户准备材料所需要的时间（例如提供模板DNA）。腺病毒载体可能需要更长时间。
复杂载体构建服务
复杂载体是指使用VectorBuilder标准化骨架，但由更为复杂的需要构建的元件组装而成的载体。它们通常要经过多个步骤来构建，并且涉及复杂的操作过程，例如大片段的扩增、多个片段融合、基因合成和靶向突变等。
复杂载体的额外价格和周期：
| 克隆步骤 | 额外价格 (CNY) | 额外周期 |
| 插入一个PCR片段* | ￥1,180起 | 10-16 天 |
| 插入多个融合PCR片段* | ￥1,380起 | 10-26 天 |
| 基因需要从头合成** | 基因合成费 + 加工费 | 10-30 天 |
| 靶向突变 | ￥1100/位点 | 7-9 天 |
对于克隆上面未列出的其他类型片段，例如高GC片段，简单重复或分段重复序列，可能需要额外的费用和周期。
*对于7kb<ORF<10kb的，需要额外增加￥1000 费用和 10 天的周期。对于ORF需要添加promoter、tag或者在其两端添加酶切位点的，额外费用请咨询。
**对于<10kb的ORF，合成费用将根据合成的长度定价在￥1/bp-￥1.5/bp之间。对于>10kb的ORF，基因从头合成的价格与周期请咨询。
交付内容
我们默认的质粒载体交付方式是E. coli甘油菌。对于不同的需求，我们可以提供不同规格的质粒DNA提取服务：小提（>10 ug），中提（>100 ug），大提（>300 ug），超大提（>1 mg），以及特大提（>10 mg）。对于病毒载体，病毒包装以不同规格的下游服务方式提供。
质量控制
我们的载体经过严格的质量控制步骤以保证序列与设计方案一致。常用的质量控制方式有DNA纯化、A260/280测定、酶切鉴定、Sanger测序、从甘油菌中提取质粒并重新转化等。
客户提供材料
如果客户选择自行提供载体构建的相关材料，我们将对其提供的载体骨架进行限制性内切酶酶切鉴定，并对关键区域进行测序验证。该类载体属于非标准载体，载体价格因情况而定。
如果需要提供骨架或模板，请按照“外来物品接收指南1.0”将相应材料邮寄给我们。
如何订购
视频
甘油菌使用说明
载体家构建的质粒载体一般以甘油菌形式交付。关于甘油菌的使用可参考以下视频内容：
文档
使用说明书
常见问题解答
云舟生物可使用多种策略进行载体克隆。在我们的高度优化的克隆平台上，一般的表达载体我们使用Gateway克隆和Gibson组装等方式构建，而shRNA和gRNA载体则使用基于直接连接的方式构建，价格低且周期短。此外，根据具体项目的需要，我们也可以使用从头基因合成、Golden Gate等方式构建载体。
云舟生物构建的质粒载体的宿主菌通常为VB UltraStable™，一种转化效率高（>1x109 cfu/ug）并可用于扩增不稳定重复序列的菌株。因此，我们也高度推荐您使用我们的VB UltraStable™化学感受态细胞以用于您的载体扩增实验。我们也提供其它宿主菌，如DH5α和Stbl3，可满足多样的实验需要。
质粒上的复制起点属于低拷贝型
质粒的拷贝数是由质粒上的复制起点决定的，有的复制起始点属于低拷贝型。请确认质粒上复制起点类型。对于低拷贝质粒，则需要扩大细菌培养量以获得足够的质粒DNA。
用于质粒提取的菌量过少
请检查确认质粒制备柱的结合容量以及您的质粒是高拷贝还是低拷贝质粒。对于小量提取，我们建议您收集1-5 ml过夜培养菌液。对于大量提取，如果质粒是高拷贝，我们推荐使用100-150 ml过夜培养菌液；如果是低拷贝，我们推荐使用300-500 ml过夜培养菌液。一般情况下，对于高拷贝质粒，1 ml的过夜培养菌液可以小量提取约5 ug的质粒DNA，150 ml的过夜培养菌液可以提取约500 ug的质粒DNA；对于低拷贝质粒（如pET），1 ml过夜培养菌液可以小量提取1.5-2.5 ug质粒DNA，150 ml过夜培养菌液可以提取150-200 ug质粒DNA。
只有小部分菌体含有质粒
有的抗生素，尤其是氨苄青霉素，在液体培养中会快速降解，导致不含质粒的细菌可以大量繁殖，最终使得质粒制备产量低。为了避免这种情况，请在使用前新鲜制备含氨苄青霉素的生长培养基，并确保提供足够的浓度。另外，在培养具有氨苄抗性的细菌时，请不要让菌液饱和培养时间过长。因为随着培养时间的增加，培养基的抗生素会越来越少，许多细菌细胞也已死亡且它们所含的质粒DNA会被降解，所以从过饱和培养的菌液中提取的质粒DNA产量会低。请从新鲜菌液提取质粒DNA，如果不能立即进行质粒制备，则可以将菌体离心沉淀，并储存于-80°C冰箱中备用。
直接取甘油菌进行接菌培养
直接将接收到的甘油菌或穿刺菌进行接种，可能会偶尔出现质粒制备产量低的情况。我们建议先在含有适当抗生素的LB平板上划线，然后挑取单菌落接种到含有相应抗生素的新鲜液体培养基中。具体操作说明请在菜单栏“资源中心>说明书/MSDS>甘油菌”进行查看。
没有正确使用质粒提取试剂盒
请在使用前仔细阅读质粒制备试剂盒使用说明书，防止不当操作。
质粒制备柱质量较差
某些品牌的质粒DNA制备柱质量较差，请及时检测更换相应试剂盒。