哺乳动物细胞重组蛋白表达

云舟生物在哺乳动物细胞中生产重组蛋白方面拥有丰富的专业知识。哺乳动物重组蛋白表达系统生产的目的蛋白以最接近天然的状态，是生产治疗性蛋白、疫苗和抗体的首选方法。我们可在HEK293细胞中使用高度优化的瞬时转染载体进行重组蛋白生产，并可根据客户要求在CHO细胞中进行生产。

亮点

真核生物蛋白以最接近天然状态的方式表达
包含所有必要的翻译后修饰
可采用瞬转或稳转方式表达
细胞稳转株蛋白产量极高

服务详情

Mammalian_Protein_Expression_Service

价格与周期

服务	简介	交付内容	价格（CNY）	周期
载体设计与克隆	为目的基因选择合适的融合标签、纯化标签，进行密码子优化。构建含有目的基因的哺乳动物细胞蛋白表达载体。	可选项: 含目的基因的常规质粒	--	3-5 周
方案 1: 瞬时转染表达
蛋白小量表达和纯化	瞬时转染哺乳动物细胞（如HEK293细胞），进行目的重组蛋白表达、纯化、和QC。*	0.1-0.5 mg 纯化蛋白（正常情况）生产报告	￥9,800起	3-4 周
方案 2: 细胞稳转株制备
瞬转表达评估	瞬时转染CHO细胞，评估目的蛋白表达，纯化并进行QC。*	0.1-0.5 mg 纯化蛋白（正常情况）	￥9,800起	3-4 周
细胞稳转株构建	将目的基因克隆至稳定整合载体，转染CHO细胞进行小量瞬时表达，使用ELISA进行验证。	表达评估报告	请咨询	20-26 周
	多克隆细胞群：转染CHO细胞后进行筛选，通过检测表达水平确定表达量最高的多克隆细胞群。	3 个细胞群（正常情况）， >10⁶细胞数/管（每个细胞群2管）生产报告
	单克隆：转染CHO细胞后进行筛选并分离单克隆，通过检测表达水平确定表达量最高的单克隆细胞株。	3 个细胞群（正常情况）， >10⁶细胞数/管（每个单克隆2管）生产报告
	生产并纯化0.5-1 mg目标蛋白，利用所选的细胞群或单克隆进行放大生产。	从所选细胞群或单克隆提取的0.5-1 mg纯化蛋白生产报告
	可选项: 建立所选单克隆的初代细胞库（Primary cell bank, PCB）。	所选单克隆的PCB（每个单克隆20管） COA	￥20,000起	4-6 周

* 根据构建的载体设计和蛋白质特性确定纯化方法。
** 对于哺乳动物蛋白表达系统，载体的E. coli甘油菌可能无法提供。

运输与存储

我们的载体默认以E. coli甘油菌形式交付。根据需求，我们也可以交付质粒DNA，并收取一定的额外费用。我们大部分重组蛋白以冻结的液体形式交付，并以干冰形式运输。接收到重组蛋白后，请将其存储于-20°C到-80°C的无菌容器。存储妥当的重组蛋白通常可稳定保存一年。同时，我们建议对接收到的重组蛋白进行分装以避免反复冻融。

细胞保存于含有10% DMSO的培养基，并使用干冰运输。收到细胞后，请立即将冻存管转移至液氮气相中保存，以便长期储存。细胞也可在-80°C条件下短期保存（不超过1周）。

质量控制

云舟生物克隆的所有载体都保证100%的序列准确性。云舟生物生产的所有重组蛋白均经过严格的质量控制（QC）。对于大多数系统，默认的质量控制包括：（1）酶切分析和Sanger测序验证蛋白质表达载体；（2）通过A260/280测量和SDS-PAGE确定蛋白质的浓度和纯度。下表列出了常见的额外QC项目服务。这些服务可根据具体需求提供。

在细胞稳转株开发过程中，蛋白表达情况将通过ELISA和/或其他合适的分析方法进行评估。所有交付的细胞系在发货前均将进行无菌检测。

额外QC项目	方法
内毒素检测	LAL
蛋白鉴定	Western Blot
	Intact MS (reduced)
	SEC-HPLC
	SEC-MALs
	蛋白N端测序
	宿主蛋白检测
标签去除	蛋白酶消化
动力学和亲和性分析	Octet
动力学和亲和性分析	Biacore
针对啮齿类动物的病原体检测

技术详情

载体系统

前往载体指南了解我们的哺乳动物基因表达载体。

案例研究

图1 利用哺乳动物细胞系统生产的重组蛋白。（A）SDS-PAGE结果展示了重组蛋白的分子量，纯度≥95%。（B）通过SEC-HPLC测定纯度为≥90%。（C）通过细胞生长试验测定重组蛋白的生物活性。EC50介于0.6和2.0 ng/ml之间。

客户提供载体

如需客户提供载体，请联系我们了解外来物品接收指南。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测，每一份材料附加检测费用。请注意，客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

COA

常见问题解答

如何在稳定细胞群与单克隆之间进行选择？▼

选择方式应取决于具体的应用需求。稳定细胞群通常用于研究目的，其开发周期更短。单细胞来源的克隆则具有更好的一致性，且通常产量更高。对于治疗性蛋白的生产，生产用细胞系通常要求来源于单克隆。