进一步了解 >> 我们的质量体系通过ISO 9001认证。这些产品是在我们先进的设施中严格控制下生成的。

腺相关病毒

重组腺相关病毒(AAV)是一种在体外或体内实验中均被广泛使用的病毒载体。AAV可以转导大量类型的哺乳动物细胞,并且在人体中表现为无致病性和低免疫原性,这些特点使其成为当前应用于基因治疗领域中其中一种最高效的基因递送载体。云舟生物提供高质量的AAV病毒包装服务,可以满足AAV基因治疗相关的实验需求。我们开发出一系列专有技术,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了AAV病毒包装工艺水平,特别是经由我们设计的AAV载体。我们的AAV病毒具有良好的客户评价。我们除了可以提供科研级的AAV病毒包装服务外,还可以提供用于临床应用的GMP级别AAV制备服务。

订购信息
ssAAV
scAAV
昆虫杆状病毒生产AAV
科研级Plus AAV

科研级AAV病毒包装

我们的科研级AAV病毒包装服务可以满足多样的AAV基因递送实验需求。您可以选择三质粒转染法包装AAV或者使用昆虫杆状病毒生产AAV。

生产规格应用最小滴度分装价格(CNY)周期
ssAAV病毒⼩量制备细胞培养> 2x1011 GC/ml10x25 ul¥3,180.006-12天
ssAAV病毒中量制备10x100 ul¥4,680.00
ssAAV病毒大量制备> 2x1012 GC/ml10x100 ul¥7,780.00
超纯化ssAAV病毒⼩量制备细胞培养和体内应用> 1013 GC/ml4x25 ul¥9,780.007-14天
超纯化ssAAV病毒中量制备10x50 ul¥13,980.00
超纯化ssAAV病毒⼤量制备10x100 ul¥19,980.00
超纯化ssAAV病毒超⼤量制备10x500 ul¥69,280.00起23-33 天
超纯化ssAAV病毒特⼤量制备10x1 ml¥111,280.00起40-50 天
其它规格请咨询
提示:
1. GC = Genome copies。
2. AAV血清型3、4的滴度通常偏低。对于这些血清型我们保证其滴度是其它血清型最小滴度的50%。
3. 对于超纯化AAV病毒,病毒颗粒经过CsCl梯度密度离心纯化。

科研级AAV病毒包装

我们的科研级AAV病毒包装服务可以满足多样的AAV基因递送实验需求。您可以选择三质粒转染法包装AAV或者使用昆虫杆状病毒生产AAV。

生产规格应用最小滴度分装价格(CNY)周期
scAAV病毒⼩量制备细胞培养> 2x1011 GC/ml10x25 ul¥3,180.006-12天
scAAV病毒中量制备10x100 ul¥4,680.00
scAAV病毒大量制备> 2x1012 GC/ml10x100 ul¥7,780.00
超纯化scAAV病毒⼩量制备细胞培养和体内应用> 1013 GC/ml4x25 ul¥9,780.007-14天
超纯化scAAV病毒中量制备10x50 ul¥13,980.00
超纯化scAAV病毒⼤量制备10x100 ul¥19,980.00
超纯化scAAV病毒超⼤量制备10x500 ul¥69,280.00起23-33 天
超纯化scAAV病毒特⼤量制备10x1 ml¥111,280.00起40-50 天
其它规格请咨询
提示:
1. GC = Genome copies。
2. AAV血清型3、4的滴度通常偏低。对于这些血清型我们保证其滴度是其它血清型最小滴度的50%。
3. 对于超纯化AAV病毒,病毒颗粒经过CsCl梯度密度离心纯化。

科研级AAV病毒包装

我们的科研级AAV病毒包装服务可以满足多样的AAV基因递送实验需求。您可以选择三质粒转染法包装AAV或者使用昆虫杆状病毒生产AAV。

生产规格应用最小滴度分装价格(CNY)周期
超纯化AAV病毒⼩量制备细胞培养与体内应用>5x1013 GC/ml10x100 ul¥39,200.0035-49天
超纯化AAV病毒中量制备>5x1013 GC/ml25x200 ul¥141,480.00
超纯化AAV病毒⼤量制备>5x1013 GC/ml50x200 ul¥267,280.00
提示:
1. GC = Genome copies。
2. 昆虫杆状病毒生产的AAV只可选择以下的AAV血清型:1、2、5、6、8、9。
3. 对于超纯化AAV病毒,病毒颗粒经过CsCl梯度密度离心纯化。

科研级Plus AAV病毒包装

我们的科研级Plus AAV病毒相较于常规科研级AAV具有更高的纯度,适用于需要排除包装细胞蛋白、内毒素等杂质的极为敏感的实验应用,也适用于那些对纯化方式、滴度、配方等有特定要求的需求。点击查看科研级Plus AAV与常规科研级AAV在纯化方式和质量标准上的比较。

生产规格应用病毒总量分装价格(CNY)周期
超纯化科研级Plus AAV小量制备多种体外与体内应用1013 GC请咨询¥29,980.00起10-20天
超纯化科研级Plus AAV中量制备5x1013 GC¥103,980.00起21-28天
超纯化科研级Plus AAV大量制备1014 GC¥166,980.00起
提示:
1. GC = Genome copies。
2. 上表的价格和周期是基于CsCl密度梯度离心的纯化方法计算的。若您需要使用其它纯化方法(碘克沙醇梯度密度离心、亲和层析色谱、离子交换色谱等),请给我们发送咨询
服务详情
病毒类型

我们提供的AAV类型

  • 单链AAV(Single-stranded AAV,ssAAV)和自互补AAV(Self-complementary AAV,scAAV)
  • 多种血清型:1、 2、3、4、5、6、6.2、7、8、9、rh10、PHP.eB、PHP.S、AAV2-retro、AAV2-QuadYF和AAV2.7m8等
  • AAV空壳和类病毒颗粒(Virus-like particle,VLP)

我们提供的AAV的包装服务涵盖以下血清型:

按照血清型分类
按照组织嗜性分类
血清型组织嗜性
AAV1平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜, 内耳组织, 胰腺, 心脏, 肝
AAV2平滑肌, 中枢神经系统, 肝, 肾, 视网膜, 内耳组织
AAV3平滑肌, 肝, 肺
AAV4中枢神经系统, 视网膜, 肺, 肾
AAV5平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜
AAV6平滑肌, 心脏, 肺, 脂肪组织, 肝
AAV6.2肺, 肝, 内耳组织
AAV7平滑肌, 视网膜, 中枢神经系统, 肝
AAV8平滑肌, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 肝, 胰腺, 心脏, 肾, 脂肪组织
AAV9平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 脑,视网膜, 内耳组织, 睾丸, 肾
AAV-rh10平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 肾
AAV-DJ肝, 心脏, 肾, 脾
AAV-DJ/8肝, 脑, 脾
AAV-PHP.eB中枢神经系统
AAV-PHP.S外周神经系统
AAV2-retro脊神经
AAV2-QuadYF内皮细胞
AAV2.7m8视网膜, 内耳组织
组织推荐使用的AAV血清型
平滑肌AAV1, AAV2, AAV3, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-rh10
中枢神经系统AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV-PHP.eB
外周神经系统AAV-PHP.S
AAV1, AAV2, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-DJ/8
视网膜AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV2.7m8
内耳组织AAV1, AAV2, AAV6.2, AAV8, AAV9, AAV2.7m8
AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV6.2, AAV9, AAV-rh10
AAV1, AAV2, AAV3, AAV6, AAV6.2, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8
胰腺AAV1, AAV2, AAV6, AAV8, AAV9, AAV-rh10
心脏AAV1, AAV4, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV-DJ
AAV2, AAV4, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8
脂肪组织AAV6, AAV8, AAV9
睾丸AAV2, AAV9
AAV-DJ, AAV-DJ/8
脊神经AAV2-retro
内皮细胞AAV2-QuadYF

注意:携带目的基因的转移质粒上的ITR序列来自于AAV2。一般来说,包装不同血清型的AAV,指的是使用不同血清型的衣壳蛋白表达质粒,与携带AAV2 ITR的转移质粒进行包装。

查看不同腺相关病毒血清型病毒衣壳蛋白1(VP1)的氨基酸序列 >>

交付内容
ssAAV
scAAV
昆虫杆状病毒生产AAV
非纯化ssAAV制备服务纯化ssAAV制备服务
交付内容

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>2x1011GC/ml,10x25 ul
  • 中量制备:>2x1011GC/ml,10x100 ul
  • ⼤量制备:>2x1012GC/ml,10x100 ul

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4x25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10x50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10x100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送:

  • ⼩量制备:>2x1011GC/ml,100 ul
  • 中量制备:>2x1011GC/ml,2x100 ul
  • ⼤量制备:>2x1011GC/ml,2x100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4x25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10x50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10x100 ul

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>2x1011GC/ml,10x25 ul
  • 中量制备:>2x1011GC/ml,10x100 ul
  • ⼤量制备:>2x1012GC/ml,10x100 ul

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4x25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10x50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10x100 ul
病毒重悬液50 mM Tris-based缓冲液pH7.4 PBS-based缓冲液
运输/存储干冰/-80°C,避免反复冻融干冰/-80°C,避免反复冻融
推荐应用体外培养细胞转导体外培养细胞转导、动物体内细胞转导

对照病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:

对照病毒对照载体名称对照载体ID定制病毒
EGFP对照AAV病毒pAAV[Exp]-CAG>EGFP:WPREVB010000-9287ffw哺乳动物基因表达AAV病毒(包含Tet-On诱导表达和FLEX条件性表达)、哺乳动物AAV CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达AAV病毒
mCherry对照AAV病毒pAAV[Exp]-CMV>mCherryVB900129-0800rvh
Scramble shRNA对照AAV病毒,EGFP荧光pAAV[shRNA]-CAG>EGFP-U6>Scramble_shRNAVB010000-9489hhg哺乳动物shRNA干扰AAV病毒
Scramble shRNA对照AAV病毒,mCherry荧光pAAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNAVB010000-0024wah
Scramble miR30-shRNA对照AAV病毒,EGFP荧光pAAV[miR30]-CAG>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPREVB010000-9494mnd哺乳动物miR30-shRNA干扰AAV病毒
Tet-On EGFP 对照AAV病毒(选购)pAAV[Tet_on]-TRE>EGFP-CBh>tTS:T2A:rtTAVB010000-0053bwh哺乳动物基因Tet-On诱导表达AAV病毒
FLEX-EGFP对照AAV病毒(选购)pAAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP)VB180820-1044gcq哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒

辅助病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如,如果定制病毒是一个只含TRE启动子的TetOn慢病毒,则需要一个表达rtTA的辅助病毒,才能进行诱导表达实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示:

辅助病毒辅助载体名称辅助载体ID定制病毒
SaCas9 AAV病毒(选购)pAAV[Exp]-CMV>saCas9VB010000-9382per哺乳动物gRNA AAV病毒(不含Cas9)
Cre AAV病毒(选购)pAAV[Exp]-CMV>CreVB010000-9443kev哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒
非纯化scAAV制备服务纯化scAAV制备服务
交付内容

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>2x1011GC/ml,10x25 ul
  • 中量制备:>2x1011GC/ml,10x100 ul
  • ⼤量制备:>2x1012GC/ml,10x100 ul

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4x25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10x50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10x100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送:

  • ⼩量制备:>2x1011GC/ml,100 ul
  • 中量制备:>2x1011GC/ml,2x100 ul
  • ⼤量制备:>2x1011GC/ml,2x100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4x25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10x50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10x100 ul

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>2x1011GC/ml,10x25 ul
  • 中量制备:>2x1011GC/ml,10x100 ul
  • ⼤量制备:>2x1012GC/ml,10x100 ul

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4x25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10x50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10x100 ul
病毒重悬液50 mM Tris-based缓冲液pH7.4 PBS-based缓冲液
运输/存储干冰/-80°C,避免反复冻融干冰/-80°C,避免反复冻融
推荐应用体外培养细胞转导体外培养细胞转导、动物体内细胞转导

对照病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:

对照病毒对照载体名称对照载体ID定制病毒
EGFP对照scAAV病毒pscAAV[Exp]-CMV>EGFP:WPREVB010000-9304aud哺乳动物基因表达scAAV病毒
Scramble shRNA对照scAAV病毒,EGFP荧光pscAAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNAVB010000-9343nhh哺乳动物shRNA干扰scAAV病毒
纯化AAV制备服务(通过杆状病毒转导Sf9昆虫细胞制备)
交付内容

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>5x1013GC/ml,10x100 ul
  • 中量制备:>5x1013GC/ml,25x100 ul
  • ⼤量制备:>5x1013GC/ml,50 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>5x1013GC/ml,10x100 ul
  • 中量制备:>5x1013GC/ml,25x100 ul
  • ⼤量制备:>5x1013GC/ml,50 x 100 ul
病毒重悬液pH7.4 PBS-based缓冲液
运输/存储干冰/-80°C,避免反复冻融
推荐应用体外培养细胞转导、动物体内细胞转导

对照病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:

对照病毒对照载体名称对照载体ID定制病毒
超纯化EGFP对照AAV病毒,杆状病毒感染Sf9方法pBV-ITR-CMV>EGFP-ITRVB010000-9306ded哺乳动物基因表达AAV病毒(通过杆状病毒转导Sf9昆虫细胞制备)
运输/储存

我们的AAV病毒存储在特殊的Tris缓冲液或PBS缓冲液中,并采用干冰运输。收到AAV病毒后,立即放置于-80℃,可保存约一年。若放置于-20℃,则可保存2-3周。融解后的AAV病毒可在4℃保存1-2周。虽然AAV病毒比其他多数病毒稳定(如慢病毒),但是也请避免反复冻融,因为这会导致AAV病毒滴度显著下降。

不同级别的AAV比较

下表比较了我们不同级别的AAV病毒。

科研级(非纯化)科研级(超纯化)科研级Plus
纯化方式-CsCl梯度密度离心

CsCl梯度密度离心(默认)

碘克沙醇梯度密度离心(可选)

亲和层析色谱(可选)

离子交换色谱(可选)

滴度> 1012 GC/ml> 1013 GC/ml1013 - 5x1013 GC/ml
纯度(SDS-PAGE)-> 80%> 90%
内毒素水平< 30 EU/ml< 10 EU/ml< 2 EU/ml
完整衣壳比率-> 70%> 80%
生产/质控
三质粒转染法生产AAV
昆虫杆状病毒生产AAV

我们通常使用三质粒系统包装重组AAV病毒。该系统采用一个携带目的基因的转移质粒、一个Rep-Cap表达质粒以及一个表达腺病毒基因(E2、E2A和VA)的辅助质粒供转染HEK293T包装细胞。细胞短暂孵育后,根据血清型的不同,收集上清或者细胞裂解液,PEG浓缩获取病毒颗粒。对于超纯化AAV(体内应用级别),再通过氯化铯(CsCl)密度梯度离心对病毒颗粒进一步纯化和浓缩。

Typical workflow of tripel transfection-based AAV packaging and quality control.

图1 三质粒法包装AAV的典型流程

对于每一批我们生产的AAV病毒,我们的质量控制包括qPCR滴度检测、微生物负荷检测(针对细菌、真菌)、支原体检测等。若转移载体同时编码一个荧光标记基因,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况。此外,对于超纯化AAV病毒,我们还可以检测内毒素水平和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度。

我们的使用杆状病毒包装AAV的工作流程包括两个主要步骤,如图1所示。步骤1中产生两种重组杆状病毒,第一个表达目的基因(GOI),其两侧有AAV反向末端重复序列 (Inverted terminal repeat,ITR),第二个则是辅助杆状病毒表达AAV rep和cap基因。在步骤2中,通过将步骤1产生的两种重组杆状病毒共同感染昆虫细胞来产生重组AAV颗粒。

为产生两种重组杆状病毒(一种表达GOI,其两侧是AAV ITR;另一种表达AAV rep/cap基因),首先需要将每种杆状病毒的表达盒克隆至杆状病毒转移载体中。然后将杆状病毒转移载体与表达Tn7转座酶的辅助质粒共转化至含有杆状病毒穿梭空载体(又名杆粒)的细菌宿主中,以产生重组杆粒。然后将重组杆粒转染到昆虫Sf9细胞中。经过短暂的孵育期,从培养基中收集病毒颗粒并使用蔗糖梯度密度离心进一步浓缩。我们采用qPCR测定杆状病毒滴度。然后将两种重组杆状病毒共感染昆虫细胞中。在72-96 小时的孵育期后,从细胞裂解液和上清液中收集AAV颗粒,并通过PEG沉淀法进行浓缩。对于超纯化 AAV(体内应用级别),AAV病毒颗粒通过氯化铯 (CsCl) 梯度超速离心进一步纯化和浓缩。我们使用qPCR测定AAV滴度。

图2 Baculovirus-AAV的典型生产流程

对于每个我们生产的AAV,我们的QC包括qPCR滴度测定(Titer measurement)、微生物检测(Bioburden test,针对细菌、真菌)、支原体检测(Mycoplasma test)等。若转移载体同时编码一个荧光蛋白,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况(Transduction test)。此外,对于超纯化AAV病毒,我们还可以检测内毒素水平(Endotoxin test)和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度(Virus purity test)。

下表展示了我们可提供的AAV QC方法。

其它可选购的QC服务方法
滴度检测ddPCR
TCID50
AAV复制能力检测qPCR
完整衣壳/空衣壳分析TEM
CDMS
SV-AUC
滴度保证

我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ ITR到3’ ITR)小于腺相关病毒承载限度(4.7 kb,~野生型AAV2基因组长度)的载体。超过该范围,超出4.7 kb的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉,导致包装出来的AAV病毒颗粒含有不完整的基因组,不仅影响ITR qPCR滴度检测,而且影响转基因表达。此外,对于如下情况,我们同样不能保证滴度:

  • AAV血清型3和4的滴度通常偏低。对于这些血清型我们保证其滴度是其它血清型最小滴度的50%。
  • 包含对包装过程有不利影响的序列,例如毒性基因(如促凋亡基因);破坏包装细胞或病毒的完整性(如导致细胞聚集的膜蛋白)的基因 ;易于重排或者产生二级结构的序列(如重复序列或者高GC含量序列)。
  • ⽤户提供的载体,因为我们无法控制载体质量。
客户提供载体

如需客户提供AAV病毒载体,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

试验验证

三质粒转染法生产的AAV

我们开发了一系列专有技术用以优化三质粒转染法包装AAV的效率。我们的三质粒转染法包装的AAV在哺乳动物细胞中表现出很高的转导效率。

视频

暂无

文档

使用说明书

腺相关病毒体外应用

腺相关病毒体内应用

基因治疗专题

心脏研究专用AAV

神经研究专用AAV

肝脏研究专用AAV

肌肉研究专用AAV

COA

常见问题解答
慢病毒MMLV腺病毒AAV
组织嗜性广泛广泛hAd5只感染表达CAR受体的细胞取决于血清型
是否可感染非分裂细胞
病毒基因组稳定整合抑或游离于宿主基因组稳定整合稳定整合游离的DNA附加体形式游离的DNA附加体形式
自定义启动子
应用细胞培养和体内实验细胞培养和体内实验体内实验体内实验
体内免疫反应非常低

我们通过裂解AAV病毒颗粒,然后以qPCR测定裂解产物中的AAV基因组拷贝数(ITR区域的拷贝数)来获取AAV的物理滴度(Physical titer)。其他滴度测定方式如ddPCR、TCID50以选购方式提供。

相关服务
载体设计