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腺相关病毒包装

腺相关病毒(Adeno-associated virus,简称AAV)是一种应用广泛的转基因载体,能有效感染分裂和非分裂的哺乳动物细胞,并最终病毒基因组游离于细胞基因组外。因其结构简单、超低的免疫原性、高效的基因转导率、可长期稳定保存,AAV已经成为当今炙手可热的基因治疗工具。我们开发出一系列专有技术和试剂,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺相关病毒包装工艺水平,对于在我们载体构建服务中用到的腺相关病毒载体尤其如此。因此, 结合我们的线上载体设计平台、线下载体和病毒生产线,我们能持续地提供高质量的定制化腺相关病毒产品。

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腺相关病毒类型

我们提供ssAAV(single-stranded AAV)和scAAV(self-complementary AAV)的包装服务,涵盖的血清型包括:AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAVrh10、AAV-DJ、AAV-DJ/8、AAV-PHP.eB、AAV-PHP.S、AAV2-retro以及AAV2-QuadYF

注意:携带目的基因的转移质粒上的ITR序列来自于AAV2。一般来说,包装不同血清型的AAV,指的是使用不同血清型的衣壳蛋白表达质粒,与携带AAV2 ITR的转移质粒进行包装。

查看不同腺相关病毒血清型病毒衣壳蛋白1(VP1)的氨基酸序列 >>

价格和周期

由于技术上的优势,我们的腺相关病毒包装具有更高的质量、更高效、更实惠。不同规格的腺相关病毒包装价格和周期如下所示:

规格 推荐使用 滴度 & 体积* 价格 (CNY) 周期**
小规格 细胞培养 >1011 GC/ml,10x 25 ul,PBS 缓冲液 ¥3100 15-25天
中规格 细胞培养 >1011 GC/ml,10x 100 ul,PBS 缓冲液 ¥4600 15-25天
大规格 细胞培养 >1012 GC/ml,10x 100 ul,PBS 缓冲液 ¥7700 15-25天
小规格和超纯化 动物体内 >1013 GC/ml,4x 25 ul,PBS 缓冲液 ¥8500 20-30天
中规格和超纯化 动物体内 >1013 GC/ml,10x 50 ul,PBS 缓冲液 ¥10500 20-30天
大规格和超纯化 动物体内 >1013 GC/ml,10x 100 ul,PBS 缓冲液 ¥13100 20-30天

*我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ ITR到3’ ITR)小于腺相关病毒承载限度(4.7 kb,~野生型AAV2基因组长度)的载体。超过该范围,超出4.7 kb的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉,导致包装出来的AAV病毒颗粒含有不完整的genome,不仅影响ITR qPCR滴度检测,而且影响转基因表达。此外,对于如下载体,我们同样不能保证滴度:

  • 包含对包装过程有不利影响的序列,例如毒性基因(如促凋亡基因);破坏包装细胞或病毒的完整性(如导致细胞聚集的膜蛋白)的基因 ;易于重排或者产生二级结构的序列(如重复序列或者高GC含量序列)。
  • ⽤户提供的载体,因为我们无法控制载体质量。

**周期是指订单接受到发货之间的时间。不包括需要客户提供任何物料(如病毒载体)的等待时间。

交付内容

如果您选择非超纯化腺相关病毒包装(体外应用级别),如小规格、中规格和大规格,每个订单交付内容如下:

  • 所选规格的定制腺相关病毒
  • 免费:少量对照病毒*
  • 附加购买(可选): 等量的辅助病毒**

如果您选择超纯化腺相关病毒包装(体内应用级别),如小规格和超纯化、中规格和超纯化、大规格和超纯化,每个订单交付内容如下:

  • 所选规格的定制腺相关病毒
  • 附加购买(可选): 等量的对照病毒**
  • 附加购买(可选): 等量的辅助病毒**

* 对照病毒的设计与定制化病毒的生物学应用相匹配,用于转导测试。例如,如果定制化的病毒过表达一个基因,则提供的对照病毒过表达EGFP蛋白;如果定制化病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个scramble shRNA。对照病毒详细信息如下表所示。

** 辅助病毒的设计与定制化病毒的生物学应用相匹配。例如,如果定制化的病毒是一个gRNA腺相关病毒(只表达gRNA),则需要一个表达Cas9的辅助病毒,才能进行CRISPR编辑实验。

载体系统 对照载体名称 对照载体ID 定制化病毒包装规格 对照病毒数量 价格 (CNY)
腺相关病毒
基因表达
pAAV[Exp]-
CMV>EGFP
VB150925-10026 小规格 >1011 GC/ml,100 ul,PBS缓冲液 免费
中规格 >1011 GC/ml,2x 100 ul,PBS缓冲液 免费
大规格 >1011 GC/ml,2x 100 ul,PBS缓冲液 免费
小规格和超纯化 >1013 GC/ml,4x 25 ul,PBS缓冲液 ¥1500
中规格和超纯化 >1013 GC/ml,10x 50 ul,PBS缓冲液 ¥2000
大规格和超纯化 >1013 GC/ml,10x 100 ul,PBS缓冲液 ¥2500
腺相关病毒 shRNA干扰载体 pAAV[shRNA]-
EGFP-U6>
Scramble
_shRNA
VB180117-1020znr 同上 同上 同上
腺相关病毒 miR30-shRNA干扰载体 pAAV[miR30]-
CMV>EGFP:
Scramble_
miR30-shRNA
VB180124-1104yzn 同上 同上 同上
腺相关病毒 CRISPR系统 pAAV[Exp]-
CMV>EGFP
VB150925-10026 同上 同上 同上
生产、纯化和滴定

我们常规使用的helper-free腺相关病毒包装系统包括1个转移质粒(Transfer plasmid)、1个Rep和Cap表达质粒(Rep-Cap plasmid)和1个辅助质粒(Helper plasmid),其包装过程是将携带目的基因(Gene of Interest, 简称GOI)和ITR序列的转移质粒、表达特定血清型衣壳蛋白的Rep-Cap质粒和编码介导腺相关病毒复制的腺病毒基因(E2、E2A和VA)的辅助质粒共转染包装细胞,这个转染过程称为三质粒转染(Triple transfection)。 短暂孵育后,收集细胞,裂解细胞释放病毒颗粒。对于超纯化腺相关病毒(体内应用级别),再通过氯化铯(CsCl)密度梯度离心对病毒颗粒进一步纯化和浓缩。我们采用ITR qPCR方法检测腺相关病毒滴度。

质量控制

对于每一个我们生产的腺相关病毒,质量控制均包括滴度测定(Titer determination)、微生物(细菌和真菌)检测(Bioburden test)、支原体检测(Mycoplasma test)。若转移载体同时编码一个荧光蛋白,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况(Transduction test)。此外,对于超纯化腺相关病毒,我们还可以检测内毒素水平(Endotoxin test)和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度(Virus purity test)。

客户提供载体

如需客户提供腺病毒载体,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

问题

常见技术问题请参见常见问题。有关我们产品和服务的其他更多信息,请按照此处联系方式咨询载体家服务团队。