分析方法开发

在基因治疗药物制备中，严格的质量控制要求往往极具挑战性。原因主要有两方面，第一，基因治疗载体在结构和功能上的复杂程度要比小分子化药乃至蛋白生物制剂都要高出不少。由此在鉴别和分析基因治疗药物的完整性和纯度上存在明显困难。第二，基因治疗载体生产过程涉及到复杂的生物反应，容易导入许多生物杂质，它们可来自于细胞碎片或是混杂的传染因子。这些杂质需要用多种复杂的方法来进行鉴定。综上原因，基因治疗药物需要采用众多质检分析方法来确认其有效性和安全性。对应工艺开发平台，云舟生物可以提供全范围的分析方法开发服务，可为单个定制的基因治疗载体开发优化工艺过程和放行的分析方法验证和确认。我们也可以提供药物稳定性研究服务，在不同储存和运输条件下测试载体的保质期。

我们的分析方法开发服务包括：

质控分析

  • 一般要求/物理特性

    外观、浓度、pH值、可抽取体积、渗透压、分散性

  • 特性鉴定

    酶切鉴定、测序、琼脂糖凝胶电泳、SDS-PAGE电泳、免疫检测

  • 单位含量/效价鉴定
    • 物理滴度：qPCR、ddPCR、免疫检测、OD260/280
    • 感染活性滴度：噬斑法、TCID50法
    • 基因导入表达：转导测试、Western blot、RT-PCR
  • 纯度
    • 成品相关
      • 完整病毒与空壳病毒比率：TEM
      • 质粒超螺旋比率：琼脂糖凝胶电泳、HPLC
    • 宿主细胞相关
      • 宿主细胞蛋白：免疫检测、SDS-PAGE电泳、银染法、Micro-BCA、BCA、HPLC
      • 宿主细胞DNA：qPCR、琼脂糖凝胶电泳
      • 宿主细胞RNA：琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR、荧光定量分析
    • 工艺相关
      • 质粒DNA残留：qPCR
      • 核酸酶残留：免疫检测
      • BSA残留：免疫检测
      • PEI残留：HPLC
      • 抗生素残留：免疫检测
  • 安全性
    • 无菌性检测：直接接种法、薄膜过滤法
    • 内毒素：动态显色法（KCA）
    • 支原体：qPCR法、直接培养法、指示细胞法
    • 复制型病毒检测（RCV）：qPCR、免疫检测、Southern blotting
    • 外源病毒检测：qPCR、体外细胞培养检测
    • 病毒致癌基因（如E1A和SV40）检测：qPCR

稳定性研究

稳定性研究目的是确保原料药或制剂（DS/DP）在保质期内维持稳定的质量。我们严格地按照ICH指南来评估基因治疗载体在不同正常预设或强制降解的环境条件下（如pH，温度，光线）对其效价及安全性的影响。