莫洛尼氏鼠白血病逆转录病毒(Moloney murine leukemia retrovirus,简称MMLV)是第一个被广泛使用的基因转移载体,并且是第一个使用ex vivo策略治疗遗传性疾病的载体(R.M. Blaese 1995)。使用逆转录病毒载体的优势之一是载体基因组永久整合到宿主基因组中,可长期稳定地表达转基因。MMLV逆转录病毒只能感染分裂的细胞,主要原因是它们无法穿过核膜,只能在细胞分裂过程中通过不完整的核膜来完成感染。MMLV逆转录病毒的生产需要在一个包装细胞中,从单独的包装质粒中反式表达病毒Gag、Pol和Env蛋白。我们开发出一系列专有技术和试剂,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了逆转录病毒包装工艺水平。
订购信息
生产规格 | 总量 | 最小滴度 | 分装 | 价格(CNY) | 周期 |
MMLV逆转录病毒⼩量制备 | >2.5x106 TU | >107 TU/ml | 10x25 ul | ¥3,180.00 | 6-12天 |
MMLV逆转录病毒中量制备 | >107 TU | >107 TU/ml | 10x100 ul | ¥4,680.00 |
MMLV逆转录病毒大量制备 | >108 TU | >108 TU/ml | 10x100 ul | ¥7,780.00 |
超纯化MMLV逆转录病毒⼤量制备 | >108 TU | >108 TU/ml | 10x100 ul | ¥11,880.00 |
服务详情
病毒类型
我们提供2种逆转录病毒包装服务:
- VSV-G假病毒化的MMLV逆转录病毒,利用5’ LTR表达目的基因;
- VSV-G假病毒化的SIN (Self-inactivation)MMLV逆转录病毒,利用internal promoter表达目的基因。
交付内容
| 非纯化MMLV逆转录病毒制备服务 | 纯化MMLV逆转录病毒制备服务 |
交付内容 | 定制病毒,按照规格交付: - ⼩量制备:>107TU/ml,10x25 ul
- 中量制备:>107TU/ml,10x100 ul
- ⼤量制备:>108TU/ml,10x100 ul
| 定制病毒,按照规格交付: |
对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送: - ⼩量制备:>107TU/ml,100 ul
- 中量制备:>107TU/ml,2x100 ul
- ⼤量制备:>107TU/ml,2x100 ul
| 对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购: |
聚凝胺(Polybrene,5 mg/ml,200 ul),赠送 | 聚凝胺(Polybrene,5 mg/ml,200 ul),赠送 |
病毒重悬液 | HBSS缓冲液 | HBSS缓冲液 |
运输/存储 | 干冰/-80°C,避免反复冻融 | 干冰/-80°C,避免反复冻融 |
推荐应用 | 体外培养细胞转导 | 体外培养细胞转导、动物体内细胞转导 |
对照病毒
为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。推荐的对照病毒信息如下表所示:
对照病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 |
EGFP对照MMLV逆转录病毒, Puro抗性 | pMMLV[Exp]-EGFP/Puro | VB010000-9307ddn | 哺乳动物基因表达MMLV逆转录病毒、哺乳动物非编码RNA表达MMLV逆转录病毒 |
EGFP对照自失活MMLV逆转录病毒, Puro抗性 | pMMLV-SIN[Exp]-MSCV>EGFP/Puro | VB010000-9478ycv | 自失活MMLV逆转录病毒 |
运输/储存
我们的MMLV逆转录病毒存储在HBSS缓冲液中,并采用干冰运输。收到病毒后,立即放置于-80℃,长期贮存至少6个月。MMLV逆转录病毒的保质期约为一年。请避免反复冻融,因为这会导致病毒滴度大幅下降。
生产/质控
在我们生产MMLV逆转录病毒的过程中,首先将携带目的基因(GOI)的转移载体与我们专有的编码VSV-G的包膜载体、以及编码Gag和Pol的包装载体共同转染至包装细胞。经过短暂孵育后,收集上清液进行离心以去除细胞碎片,随后进行过滤。病毒颗粒随后通过聚乙二醇(PEG)进行浓缩。如需制备超纯化MMLV逆转录病毒(体内应用级别),病毒颗粒还需通过蔗糖梯度超速离心进行进一步纯化与浓缩。我们采用基于qPCR的方法来测定MMLV病毒的功能滴度。
对于我们生产的每一个重组MMLV逆转录病毒,其质量控制包括滴度测定、细菌和真菌/无菌检测以及支原体检测。如果转移载体编码荧光蛋白,我们将进行转导测试以检测相应的荧光信号;若转移载体编码药物筛选标记,则会在转导测试后实施相应的药物筛选。此外,对于超纯化MMLV逆转录病毒,我们默认进行内毒素检测以评估内毒素水平。如需在质检报告(COA)中体现内毒素结果,需支付额外费用。其它质量控制服务可根据需求提供。
滴度保证
我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ LTR的R元件的第一个碱基到3’ LTR的R元件的最后一个碱基)小于MMLV逆转录病毒承载限度(8.3 kb,~野生型MMLV逆转录病毒基因组长度)的载体。超过该范围,载体也许会被包装进病毒,但会造成病毒滴度降低。此外,对于如下载体,我们同样不能保证滴度:
- 包含对包装过程有不利影响的序列,例如毒性基因(如促凋亡基因、针对MMLV的host factors);破坏包装细胞或病毒的完整性(如导致细胞聚集的膜蛋白、含有polyA信号序列)的基因;易于重排或者产生二级结构的序列(如重复序列或者高GC含量序列)。
- 用户提供的载体,因为我们无法控制载体质量。
交付周期
交付周期是指订单接收到发货之间的时间,不包括需要客户提供任何物料(如病毒载体)的等待时间。
客户提供载体
如需客户提供MMLV病毒载体,请联系我们了解外来物品接收指南。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。
视频
暂无
文档
使用说明书
MMLV逆转录病毒
常见问题解答
| 慢病毒 | MMLV | 腺病毒 | AAV |
组织嗜性 | 广泛 | 广泛 | hAd5只感染表达CAR受体的细胞 | 取决于血清型 |
是否可感染非分裂细胞 | 是 | 否 | 是 | 是 |
病毒基因组稳定整合抑或游离于宿主基因组 | 稳定整合 | 稳定整合 | 游离的DNA附加体形式 | 游离的DNA附加体形式 |
自定义启动子 | 是 | 否 | 是 | 是 |
应用 | 细胞培养和体内实验 | 细胞培养和体内实验 | 体内实验 | 体内实验 |
体内免疫反应 | 低 | 低 | 高 | 非常低 |
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