MMLV逆转录病毒包装

MMLV逆转录病毒（Moloney murine leukemia virus，简称MMLV retrovirus）载体是一种有效的病毒载体工具，能将外源基因永久性地导入分裂细胞中（与同属逆转录病毒家族中的慢病毒不同，慢病毒可以感染分裂和非分裂细胞）。作为一种基因传递方法，MMLV逆转录病毒载体在产生iPS细胞方面的表现尤其突出。我们开发出一系列专有技术和试剂，从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了MMLV逆转录病毒包装工艺水平，对于在我们载体构建服务中用到的MMLV逆转录病毒载体尤其如此。因此，结合我们的线上载体设计平台和线下载体和病毒生产线，我们能持续地提供高质量的定制化MMLV逆转录病毒产品。

如何获取MMLV逆转录病毒包装服务

MMLV逆转录病毒类型

我们提供2种逆转录病毒包装服务：

• VSV-G假病毒化的MMLV逆转录病毒，利用5’ LTR表达目的基因；
• VSV-G假病毒化的SIN (Self-inactivation）MMLV逆转录病毒，利用internal promoter表达目的基因。

价格和周期

由于技术上的优势，我们的逆转录病毒包装具有更高的质量、更高效、更实惠。不同规格的MMLV逆转录病毒包装价格和周期如下所示：

*我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域（从5’ LTR的R元件的第一个碱基到3’ LTR的R元件的最后一个碱基）小于MMLV逆转录病毒承载限度（8 kb，～野生型MMLV逆转录病毒基因组长度）的载体。超过该范围，载体也许会被包装进病毒，但会造成病毒滴度降低。此外，对于如下载体，我们同样不能保证滴度：

• 包含对包装过程有不利影响的序列，例如毒性基因（如促凋亡基因、针对MMLV的host factors）；破坏包装细胞或病毒的完整性（如导致细胞聚集的膜蛋白、含有polyA信号序列）的基因；易于重排或者产生二级结构的序列（如重复序列或者高GC含量序列）。
• 用户提供的载体，因为我们无法控制载体质量。

**周期是指订单接收到发货之间的时间，不包括需要客户提供任何物料（如病毒载体）的等待时间。

交付内容

如果您选择非超纯化MMLV逆转录病毒包装（体外应用级别），如小规格、中规格和大规格，每个订单交付内容如下：

• 所选规格的定制病毒
• 免费：少量对照病毒*
• 免费：Polybrene（5 mg/ml，200 ul）
• 附加购买（可选）： 等量的辅助病毒**

如果您选择超纯化MMLV逆转录病毒包装（体内应用级别），如大规格和超纯化，每个订单交付内容如下：

• 所选规格的定制病毒
• 附加购买（可选）： 等量的对照病毒*
• 免费：Polybrene（5 mg/ml，200 ul）
• 附加购买（可选）： 等量的辅助病毒**

* 对照病毒的设计与定制化病毒的生物学应用相匹配，并用于转导测试。例如，如果定制化的病毒过表达一个基因，则提供的对照病毒表达荧光蛋白EGFP；如果定制化病毒表达打靶某个基因的shRNA，则对照病毒表达一个scramble shRNA。对照病毒详细信息如下表所示。

** 辅助病毒的设计与定制化病毒的生物学应用相匹配。例如，如果定制化的病毒是一个TetOn病毒（只含有TRE启动子基因盒子），则需要一个表达rtTA的辅助病毒，才能进行诱导表达实验。

生产、纯化和滴定

我们常规使用的MMLV逆转录病毒包装系统包括1个转移质粒（Transfer plasmid）、1个膜蛋白表达质粒（Envelope plasmid）、1个包装质粒（Packaging plasmid），其包装流程是将携带目的基因（Gene of Interest， 简称GOI）的转移质粒、VSV-G包膜蛋白表达质粒和包装质粒（表达Gag/Pol）共转染包装细胞。短暂孵育后，收集上清，离心去除细胞碎片，再过滤，接着通过PEG浓缩病毒颗粒。对于超纯化MMLV逆转录病毒（体内应用级别），采用蔗糖离心方法进一步纯化、浓缩病毒。我们采用基于qPCR的方法测定MMLV逆转录病毒的功能滴度。

质量控制

对于每一个我们生产的MMLV逆转录病毒，质量控制均包括滴度测定（Titer determination）、微生物（细菌和真菌）检测（Bioburden test）、支原体检测（Mycoplasma test）。若转移载体同时编码一个荧光蛋白，我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况（Transduction test）。此外，对于超纯化MMLV逆转录病毒，我们还可以检测内毒素水平（Endotoxin test）。

客户提供载体

如需客户提供MMLV逆转录病毒载体，则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测，每一份材料附加检测费用。请注意，客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

问题

常见技术问题请参见常见问题。有关我们产品和服务的其他更多信息，请按照此处联系方式咨询载体家服务团队。