IVT mRNA和LNP制备

云舟生物为体外转录的mRNA(IVT mRNA)和纳米脂质颗粒(LNP)疗法开发提供全范围的CRO和CDMO服务。基于我们革命性的载体设计平台和丰富的载体设计经验,我们可以针对体外转录载体设计、大规模IVT mRNA制备以及LNP封装提供工艺优化,并为您的科研和临床需求量身定制合适的质量控制方案。我们提供多个等级的IVT mRNA,可以覆盖从药物开发到临床前研究的各种下游领域应用。

IVT mRNA的生产流程

我们可提供的IVT mRNA等级

  • 科研级别mRNA

    科研级别mRNA适用于基础研究及药物发现研究。此级别mRNA在标准的实验室环境下生产,通过严谨的质量控制流程确保客户获得高质量的mRNA,以符合各类下游研究的应用。

  • GMP-like mRNA

    GMP-like mRNA适用于临床前研究阶段,如在动物体内测试药物安全性和代谢的研究。此级别mRNA基本按GMP指南关键要求进行生产,生产工艺和质量标准要求均相当,也是在独立受控的生产设施单元内生产,生产过程信息有详细规范的记录,确保可追溯。GMP-like级别可看作是小规模GMP产品的模拟生产,由此价格相较GMP更低,周期也更短。在适当情况下,GMP-like mRNA可以在无抗生素、无动物源、无RNA酶的体系下进行生产和纯化。每批产品放行都会提供COA。TSE/BSE声明如需亦可提供。

  • GMP级别mRNA(即将投产)

    GMP级别mRNA制备要求在经验证符合GMP要求的生产车间内进行生产。整个生产过程严格按全方位的质量保证体系来管控执行。通过全面的过程及放行QC检测来确保mRNA可以达到乃至超出应符合的质量及安全性要求。产品放行时,我们会提供完整记录生产流程的批放行记录。每批产品放行都会提供COA。其他特定记录如需亦可提供。

不同等级的IVT mRNA对比

科研级别GMP-like
应用基础研究应用、新药开发、临床前研究等临床前研究,比如在动物体内的药物安全性测试和代谢测试
规格mRNA: 0.1-10 mg
LNP: 0.1-3 mg
mRNA: 0.01-20 g
LNP: 3-20 mg
周期49-71天
‧ 载体设计和克隆:26-36天
‧ 质粒生产和线性化:14-21天
‧ IVT mRNA生产:14-21天
‧ LNP封装:9-14天
59-90天
‧ 载体设计和克隆:31-41天
‧ 质粒生产和线性化:14-28天
‧ IVT mRNA生产:14-28天
‧ LNP封装:14-21天
质量规范体系ISO9001适用于GMP体系的ISO9001
生产设施在共享的实验室区域中并行生产在分离的单元中生产
文件控制和可追溯性
QC项目与放行标准QC(见下表)根据每个项目的具体需求执行
无菌灌装N/A按需提供
保留样本按需提供按需提供
额外交付内容COA1. COA
2. 生产概况
3. TSE/BSE声明(按需提供)

LNP封装

云舟生物拥有完整的设施支持LNP体系混合、生产、以及全方位的质量检验。我们的生产单元已入驻用于自定义LNP配方、微流控混合、稀释、buffer交换、无菌过滤和灌装等先进设备。

图1云舟生物LNP封装的mRNA检验。(A)粒径通过动态光散射(DLS)测定。该方法可以测量粒子运动带来的散射光强度的波动变化。多分散指数(PDI)反映的则是样本中的粒子尺寸的异质性。(B)Zeta电势反映了LNP的稳定性。样本中的Zeta电势范围在-1.872到+1.872 mV之间。

质量控制检验

终产品/中间产物性质分析方法
IVT DNA 模版浓度分光光度法
DNA序列凝胶电泳、Sanger测序
线性化毛细管电泳
完整性变性胶电泳
残留宿主E. coli DNAqPCR
mRNA浓度UV-Vis分光光度法
mRNA序列毛细管电泳、反转录并进行Sanger测序
加帽效率LC-MS
Poly(A)尾巴完整性LC-MS
残留蛋白NanoOrange染色
残留质粒DNAqPCR
dsRNA斑点杂交
内毒素动态显色法(KCA)
LNP内毒素动态显色法(KCA)
封装效率RiboGreen染色
粒径、PDI以及Zeta电势Zetasizer

更多服务

云舟生物可提供用于CRISPR基因编辑的IVT Cas9 mRNA和sgRNA,以及自扩增mRNA(saRNA)。我们可使用不同的LNP配方封装IVT mRNA、siRNA、以及质粒DNA以实现多样的基因递送方式。