MegaAAV™ 递送系统

图3 使用MegaAAV™多载体系统在体外成功实现DMD的功能重建。将人DMD 基因（约11 kb）分割为三个部分（DMD-I、DMD-II、DMD-III），并分别包装到独立的AAV载体中。将包含全部三条片段的MegaAAV™和包含单个片段的AAV病毒分别转导HEK293T细胞（MOI=10^5），转导后48小时收获细胞裂解物。未转导细胞（NC）和转染含有全长DMD质粒的细胞（PC）作为对照。所有样本均使用针对DMD-II和DMD-III中的特异性区域的抗体进行Western blot分析。粉色箭头表示全长DMD基因的体外重建，青色箭头表示DMD片段。

图4 通过MegaAAV™基因递送实现有效的表型恢复。一个人类视网膜基因（约6 kb）被分为两部分：5’ 端的GOI区域包含一个N端FLAG标签，3’ 端的GOI区域包含一个C端HA标签，随后分别将其包装进基于AAV8的病毒载体中。（A）分别用含有两个片段的MegaAAV™或只包含任一片段的普通AAV载体（MOI = 105）转导HEK293T细胞，转导后72小时收集细胞裂解液。将未转导细胞（NC）以及转染了编码全长基因并带有C端HA标签质粒的细胞（PC）作为对照。粉色箭头表示视网膜基因在体外完全被重建，而青色箭头表示基因片段。（B-C）对两周龄的转基因敲除小鼠注射编码相同5’和3’区域的基因、但不含表位标签的MegaAAV™。注射后3周，如电视网膜图（B）中的b波（星号）以及视锥细胞表达分析（C）所示，经治疗的小鼠视觉功能和视网膜形态均得到很大程度的恢复。野生型（WT）和未处理的敲除（KO）小鼠亦作为对照纳入实验。