进一步了解 >> 我们的质量体系通过ISO 9001认证。这些产品是在我们先进的设施中严格控制下生成的。

昆虫细胞重组蛋白表达

使用表达目的基因的杆状病毒感染高密度昆虫细胞,是一种通用且强大的真核生物重组蛋白表达系统。昆虫表达系统保留了大多数真核翻译后修饰和蛋白质折叠的特性,因此是生产激酶和类固醇受体的首选方法。当这些蛋白在细菌细胞中生产时,由于缺少适当的磷酸化或折叠,可能会导致其失去活性。

亮点

  • 保留关键的真核生物蛋白修饰
  • 多种昆虫细胞系可选
  • 适用于分子量较大的蛋白生产
  • 适用于分泌型蛋白、胞内蛋白以及膜蛋白的生产
服务详情

 Insect cell protein expression workflow

价格与周期
服务简介交付内容价格(CNY)周期
载体设计与克隆为目的基因选择合适的融合标签、纯化标签,进行密码子优化。构建含有目的基因的杆状病毒转移载体,如pBVE. coli甘油菌¥980起1-2周
蛋白小量表达和纯化包装杆状病毒并扩增。杆状病毒转导昆虫细胞(如SF9或Hi-5)进行重组蛋白表达纯化*,并进行QC。
  • 0.5-1 mg纯化蛋白(正常情况)
  • COA
¥12,800起7-8周
蛋白大规模表达与纯化大规模生产并纯化重组蛋白。
  • 可达100+ mg纯化蛋白
  • COA
请咨询

* 根据构建的载体设计和蛋白质特性确定纯化方法。 

运输与存储

我们的载体默认以E. coli甘油菌形式交付。根据需求,我们也可以交付质粒DNA,并收取一定的额外费用。我们大部分重组蛋白以冻结的液体形式交付,并以干冰形式运输。接收到重组蛋白后,请将其存储于-20°C到-80°C的无菌容器。存储妥当的重组蛋白通常可稳定保存一年。同时,我们建议对接收到的重组蛋白进行分装以避免反复冻融。

质量控制

云舟生物克隆的所有载体都保证100%的序列准确性。云舟生物生产的所有重组蛋白均经过严格的质量控制(QC)。对于大多数系统,默认的质量控制包括:(1)酶切分析和Sanger测序验证蛋白质表达载体;(2)通过A260/280测量和SDS-PAGE确定蛋白质的浓度和纯度。下表列出了常见的额外QC项目服务。这些服务可根据具体需求提供。

额外QC项目方法
内毒素检测LAL
蛋白鉴定Western Blot
Intact MS (reduced)
SEC-HPLC
SEC-MALs
蛋白N端测序
宿主蛋白检测
标签去除蛋白酶消化
动力学和亲和性分析Octet
Biacore
针对啮齿类动物的病原体检测
技术详情
载体系统

为了在昆虫系统中表达重组蛋白,首先需要将目的基因(GOI)克隆到云舟生物的由强启动子控制的pBV载体中。该载体的表达盒两侧由Tn7转座子末端元件Tn7L和Tn7R包围。包含目的基因的载体随后被转化到携带杆粒穿梭载体和辅助质粒的大肠杆菌中。杆粒本质上是一种非常大的质粒,经过修饰整合了一个编码区插入有attTn7位点的lacZ基因。辅助质粒表达Tn7转座酶。而转座酶将介导pBV载体上由Tn7R和Tn7L包围的区域(包含目的基因的表达盒和抗性基因)转移到杆状病毒的attTn7位点。因此,可以通过药筛和蓝白筛选(lacZ的表达致使非重组菌落呈蓝色,而由于转座子插入破坏了lacZ表达,重组菌落则呈白色)来识别含有重组杆粒的菌落克隆。然后可以使用纯化的杆状病毒DNA转导昆虫细胞以产生活杆状病毒(P1)。然后将P1杆状病毒在昆虫细胞中扩增以达到合适的滴度。这些病毒可用于继续感染昆虫细胞以生产目的重组蛋白。

对于杆状病毒重组蛋白载体的更多信息,请参照我们的载体指南

图1 杆状病毒重组蛋白表达载体图谱

案例研究
Insect cell protein expression

图2 利用昆虫杆状病毒系统生产的重组蛋白。(A)SDS-PAGE结果展示了重组蛋白的分子量,纯度≥95%。(B)通过SEC-HPLC测定纯度为≥95%。(C)通过细胞生长试验测定重组蛋白的生物活性。ED50介于2和11 ng/ml之间。

客户提供载体

如需客户提供载体,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

载体设计