进一步了解 >> 我们的质量体系通过ISO 9001认证。这些产品是在我们先进的设施中严格控制下生成的。

重组蛋白表达

云舟生物提供的重组蛋白表达服务采用多种表达平台,适用于多类应用场景,包括蛋白质结构分析、酶活测定、药物开发、医学诊断以及生物工程等。我们的定制重组蛋白表达载体和蛋白表达流程经过高度优化,可生产高质量的重组蛋白。此外,我们还可以接收客户提供的载体用于生产重组蛋白。

亮点
  • 一站式解决方案:从载体设计到大规模重组蛋白生产
  • 综合性平台:可灵活选择多种表达系统
  • 定制化服务:直观易用的线上载体设计平台上可自由添加各种蛋白标签
  • 高质量:可提供多种类型的纯化方法以及质量控制项目
重组蛋白表达系统
重组蛋白表达的一般流程
Recombinant protein expression service
常见问题解答

每一种重组蛋白表达系统都有其优缺点。您需要根据您的项目选择最合适的系统。下表对比了不同蛋白表达系统的特点。

重组蛋白表达系统优势不足
细菌
  • 高性价比
  • 周期短
  • 技术简单
  • 易于放大生产
  • 高产量
  • 缺少翻译后修饰
  • 密码子与真核生物不同
  • 由于包涵体的存在,部分蛋白质难以表达
  • 有些蛋白质有细胞毒性,抑制细菌生长
哺乳动物细胞
  • 在蛋白质的天然条件下进行蛋白表达,有利于蛋白折叠且具有翻译后修饰
  • 适合分泌型蛋白和膜蛋白的表达
  • 治疗性蛋白的首选系统
  • 较长的周期
  • 细胞培养条件苛刻
  • 较难放大生产
  • 胞内蛋白表达产量低
昆虫细胞
  • 提供一定的翻译后修饰和蛋白折叠
  • 适用于分泌型蛋白、胞内蛋白、以及膜蛋白
  • 可用于表达蛋白复合体
  • 对比真核表达系统,蛋白表达量更高
  • 高密度的悬浮细胞培养有利于放大生产
  • 较长的周期
  • 细胞培养条件苛刻
  • 技术复杂
无细胞系统
  • 高效的蛋白合成技术,可在3小时内制备蛋白
  • 无需活细胞,适合毒性蛋白、复合体、不稳定蛋白的生产
  • 适合蛋白的高通量生产和筛选
  • 与自动化生产兼容
  • 易于优化表达条件
  • 有限的蛋白修饰类型可选

重组蛋白的生产常需要对蛋白添加标签。这些标签通常可以简化纯化过程,改善蛋白质水溶性、产量或纯度。如果标签设置有蛋白酶酶切位点,则可以在纯化后将其去除,而酶切的效率因目标蛋白质而异。选择适当的标签对于蛋白的表达和纯化至关重要。下表概述了常用的蛋白标签及其优缺点。

标签类型常用系统优势不足
GST细菌、昆虫细胞
  • 最大程度保持蛋白质的天然结构
  • 可使用温和条件纯化
  • 容易切割
  • 增强蛋白质的水溶性
  • 标签分子量大
  • 二聚化可能会影响目的蛋白
  • 不适用于需要变性纯化的蛋白质
His全部
  • 标签分子量小,对蛋白质影响小
  • 对于使用金属螯合亲和色谱
  • 纯化成本较低
  • 适用于变性纯化
  • 纯化时可能会同时带有其它内源性的金属亲和性蛋白,因此需要优化纯化条件
  • 对蛋白折叠和水溶性没有帮助
SUMO细菌、昆虫细胞
  • 可帮助蛋白折叠
  • 可增强蛋白的水溶性,有利于表达
  • 可能会被细菌蛋白非特异性切割
  • 不适用于需要变性纯化的蛋白质
Flag哺乳动物细胞、昆虫细胞
  • 标签分子量小,对蛋白质影响小
  • 容易检测
  • 非特异性结合少
  • 纯化效率低
MBP细菌、昆虫细胞
  • 可增强蛋白的水溶性,有利于表达
  • 标签分子量大
  • 不适用于需要变性纯化的蛋白质
Fc哺乳动物细胞、昆虫细胞
  • 哺乳动物细胞、昆虫细胞
  • 适用于分泌型蛋白
  • 标签分子量大

云舟生物克隆的所有载体都保证100%的序列准确性。云舟生物生产的所有重组蛋白均经过严格的质量控制(QC)。对于大多数系统,默认的质量控制包括:(1)酶切分析和Sanger测序验证蛋白质表达载体;(2)通过A260/280测量和SDS-PAGE确定蛋白质的浓度和纯度。下表列出了常见的额外QC项目服务。这些服务可根据具体需求提供。

额外QC项目方法
内毒素检测LAL
蛋白鉴定Western Blot
Intact MS (reduced)
SEC-HPLC
SEC-MALs
蛋白N端测序
宿主蛋白检测
标签去除蛋白酶消化
动力学和亲和性分析Octet
Biacore
针对啮齿类动物的病原体检测

云舟生物提供多种蛋白质纯化方法,包括尺寸排阻色谱(凝胶过滤)、亲和色谱、离子交换色谱和疏水相互作用色谱。对于带有His标签或GST标签的重组蛋白,通常使用亲和色谱,而对于无标签的重组蛋白,通常使用尺寸排阻色谱法(凝胶过滤)。纯化方法将基于构建的载体设计和蛋白质特性进行选择。

载体设计