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细菌（E. coli）重组蛋白表达
由于E. coli具有生产时间短、技术简单、易于放大生产和低成本等优点，因此是重组蛋白表达最常用的宿主。云舟生物对大肠杆菌中多种类型重组蛋白的表达进行了一系列实验流程上的优化，包括胞外和胞内蛋白、可溶和不可溶蛋白等。
亮点
- 低成本、高产量、易于放大生产
- 无论是可溶性蛋白还是包涵体均可进行优化
- 可选用多种载体骨架以实现最佳的表达效率
服务详情
服务详情
| 服务 | 简介 | 交付内容 | 价格（CNY） | 周期 |
|---|---|---|---|---|
| 载体设计与克隆 | 为目的基因选择合适的融合标签、纯化标签，进行密码子优化。构建含有目的基因的表达载体（如pET）。 | E. coli甘油菌 | ￥880起 | 5-10天 |
| 蛋白小试评估 | 转化合适的大肠杆菌菌株，如BL21 (DE3)。多种条件测试蛋白表达情况、蛋白稳定性、以及可溶性，并进行QC*。 | 评估报告 | ￥1,900 | 7-14天 |
| 蛋白小量表达和纯化 | 根据评估报告结果小规模生产重组蛋白并纯化**。 |
| ￥3,900起 | 14-21天 |
| 蛋白大规模表达与纯化 | 大规模生产并纯化重组蛋白。 |
| 请咨询 | |
* 对于包涵体，将经过溶解步骤，然后进行重折叠和纯化。我们将基于蛋白质的序列和结构特性来确定合适的重折叠策略。价格也将相应调整。
** 根据构建的载体设计和蛋白质特性确定纯化方法。
运输与存储
我们的载体默认以E. coli甘油菌形式交付。根据需求，我们也可以交付质粒DNA，并收取一定的额外费用。我们大部分重组蛋白以冻结的液体形式交付，并以干冰形式运输。接收到重组蛋白后，请将其存储于-20°C到-80°C的无菌容器。存储妥当的重组蛋白通常可稳定保存一年。同时，我们建议对接收到的重组蛋白进行分装以避免反复冻融。
质量控制
云舟生物克隆的所有载体都保证100%的序列准确性。云舟生物生产的所有重组蛋白均经过严格的质量控制（QC）。对于大多数系统，默认的质量控制包括：（1）酶切分析和Sanger测序验证蛋白质表达载体；（2）通过A260/280测量和SDS-PAGE确定蛋白质的浓度和纯度。下表列出了常见的额外QC项目服务。这些服务可根据具体需求提供。
| 额外QC项目 | 方法 |
|---|---|
| 内毒素检测 | LAL |
| 蛋白鉴定 | Western Blot |
| Intact MS (reduced) | |
| SEC-HPLC | |
| SEC-MALs | |
| 蛋白N端测序 | |
| 宿主蛋白检测 | |
| 标签去除 | 蛋白酶消化 |
| 动力学和亲和性分析 | Octet |
| Biacore | |
| 针对啮齿类动物的病原体检测 | |
技术详情
载体系统
常见的细菌重组蛋白表达载体系统有pET、pBAD、pCS等。其中，pET载体是一种广泛使用的载体系统。在pET载体中，目的基因位于噬菌体T7启动子下游，通过在细胞内提供T7 RNA聚合酶来激活转录表达。这种系统可利用几乎所有细胞资源用于表达目的基因。下图为 pET重组蛋白表达载体的关键元件。
关于更多细菌重组蛋白表达载体的信息，请参照我们的载体指南。
图1 pET重组蛋白表达载体图谱
案例研究
图2 利用大肠杆菌系统生产的重组蛋白。（A）SDS-PAGE结果展示了重组蛋白的分子量，纯度≥95%。（B）通过SEC-HPLC测定纯度为≥95%。（C）通过细胞生长试验测定重组蛋白的生物活性。ED50介于0.5和8 ng/ml之间。
客户提供载体
如需客户提供载体，请联系我们了解外来物品接收指南。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测，每一份材料附加检测费用。请注意，客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。