miniVec™质粒载体

云舟生物专有的miniVec™质粒是一种面向细胞和基因治疗应用的效力更显著、安全性更高且适合于大规模生产的微环DNA载体。与传统质粒相比，miniVec™质粒可获得更高的产量、更好的病毒包装效率，有利于改善转基因表达并且提高了安全性。miniVec™的载体骨架的制备支持无抗生素（Antibiotic-free）、无培养基添加剂（Supplement-free）等生产要求。miniVec™ 质粒可应用于多种如慢病毒、腺相关病毒（AAV）、体外转录（IVT）、非病毒常规质粒、piggyBac和睡美人（Sleeping Beauty）等转基因表达系统的载体设计。

miniVec™技术详情

图1展示了miniVec™系统的工作原理。作为系统的关键组成部分，miniHost™是一种经过基因改造的大肠杆菌菌株，包含一个生长抑制基因。经过miniVec™质粒转化，miniHost™细胞可以在常规LB培养基中培养，而无需使用抗生素筛选。从miniVec™骨架转录获得的VecSeqB可以通过RNA-RNA互补靶向生长抑制基因转录产物的VecSeqA序列，从而阻止生长抑制基因的翻译。因此，只有成功转化的宿主细胞才能大量增殖，从而产生大量的miniVec™质粒。

这种无需抗生素的生产方案在增强安全性和制药过程中具有显著的优势。云舟生物的miniVec™独特技术进一步保证了宿主菌细胞的存活性，在载体生产过程中消除了LB培养基中需要额外添加剂的需求。

图1 miniVec™骨架的转化筛选机制

质粒产量提升

与传统质粒相比，MiniVec™质粒包含了多种特有机制，使其在发酵培养过程中有利于高拷贝数质粒的扩增，带来了更高的复制效率且降低了细胞的代谢负担，因此可获得更高的质粒产量。

图2 与传统质粒相比，miniVec™的质粒产量增加。使用相同的条件将不同表达系统的传统质粒和miniVec™质粒分别转化大肠杆菌，以实验室规模发酵培养，然后测量对应的质粒产量。

转基因表达量提升

与传统的质粒相比，miniVec™质粒经过体外验证表明可增强转基因的表达。这是因为去除了细菌序列的微环DNA骨架进一步降低了哺乳动物细胞中的免疫反应风险，减轻宿主细胞的应激反应，有利于提升细胞的营养物质摄取和转运水平。

图3 miniVec™质粒与传统质粒的转基因表达效率对比，miniVec™的体内转基因表达更强。miniVec™因此是用于开发基因疗法和DNA疫苗的理想载体。

图4 小鼠体内实验表明，miniVec™对比传统质粒的luciferase表达时间更长。使用CAG>Luc2质粒以相同的摩尔量注射小鼠:（A）静脉注射、（B）肌肉注射。

高效的转座子基因递送

miniVec™质粒由于其简洁的序列、对宿主细胞的代谢负担低以及高安全性等特点， 使其同时也是应用于piggyBac和睡美人（Sleeping Beauty） 转座子系统的理想载体选择。miniVec™转座子载体在细胞中表现出相当高的转座效率。

1. piggyBac
2. Sleeping Beauty

图5 使用传统质粒和miniVec™质粒同时构建piggyBac和Sleeping Beauty转座子载体，随后转染HEK-293T细胞。流式细胞术检测转座效率。

更安全的病毒包装原料

MiniVec™质粒为重组病毒的GMP生产提供了一种相比传统依赖抗生素的质粒更安全的选择。MiniVec™质粒有助于降低终产物中潜在抗生素残留的风险，并减少发生基因水平转移的风险。这种特点提高了病毒GMP生产的安全性，在保证终产物纯度的同时使其更容易满足监管标准的要求。此外，MiniVec™质粒对比传统质粒可带来更高的病毒滴度。

图6 使用传统质粒与miniVec™质粒包装慢病毒的比较。（A）使用miniVec™质粒可获得更高的慢病毒滴度。功能性滴度通过qPCR法测量。（B）使用传统质粒与miniVec™质粒平行生产的慢病毒等体积转导靶细胞，比较EGFP的表达。