慢病毒包装

什么是慢病毒?

慢病毒是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,是一种逆转录病毒,其基因组为双正链RNA。慢病毒基因组已经将HIV的毒性基因删除,并通过基因工程改造了包膜蛋白,属于工程化的假病毒。慢病毒具有感染分裂与非分裂细胞的特性。

慢病毒基因组进入细胞后,可以利用逆转录酶在细胞浆中反转录为DNA并整合到细胞基因组中。整合后的DNA可以转录成mRNA并表达目的基因。

慢病毒具有宿主范围广、外源基因装载量大等特点。体外应用时,慢病毒能够有效地感染体外培养的神经元、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型原代细胞和大部分哺乳动物细胞系。由于慢病毒的感染具有整合特性,其能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,因而可以达到持久性表达,从而构建稳转细胞株,用于基因的细胞功能研究。

体内应用时,慢病毒不如腺相关病毒应用广泛,因为其具有一定的免疫原性,且病毒DNA随机整合宿主基因组的特性可能导致细胞功能基因的异常。但是另一方面,慢病毒比起腺相关病毒可以装载长度更大的外源基因片段。

为什么要用慢病毒包装?

慢病毒能够将目的基因导入到一些较难转染的细胞中,甚至是原代细胞等。由于慢病毒中的目的基因随机整合到宿主的基因组中,从而大大增加了转导效率。慢病毒介导的基因表达持续且稳定,能够在细胞系中稳定表达若干代,从而实现稳转细胞株的筛选。

慢病毒包装的优点:

  • 能将外源基因有效整合入宿主染色体,外源基因表达水平较高、表达稳定;
  • 广泛的宿主,可感染分裂和不分裂的细胞,几乎可以感染所有类型的细胞,特别适合质粒载体转染效率低的细胞;
  • 适用范围广,可用于体外细胞系和活体动物模型以过表达目的基因或进行RNAi;
  • 转导效率高,目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加。

资料来源:

https://www.zhihu.com/question/511963824
https://zhuanlan.zhihu.com/p/428394658