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#### 概述 pBAD载体系统是用于在细菌中表达重组蛋白的可靠且可控的系统，该系统通过araBAD操纵子控制大肠杆菌L- 阿拉伯糖的代谢。将目的基因置于pBAD载体中araBAD启动子的下游，当L- 阿拉伯糖存在时，araBAD启动子驱动目的基因的高效表达；当葡萄糖存在时，目的基因的表达则被抑制。该载体系统可精确控制目的基因的表达，特别适用于生产困难蛋白，如具有毒性或不溶性蛋白。 关于该载体系统的更多信息，请参考以下文献。 参考文献 | 主题 ---|--- J Bacteriol. 177:4121-30 (1995) | Development of pBAD vectors #### 亮点 首先，将目的基因克隆到pBAD载体上，并将携带该质粒的菌株在缺乏L-阿拉伯糖的生长培养基中培养以降低质粒不稳定性。然后，通过向培养基中加入L- 阿拉伯糖来诱导目的基因的表达。 我们的pBAD载体上携带的双向araBAD启动子可同时驱动目的基因和调节蛋白AraC的表达。在缺少L- 阿拉伯糖的情况下，AraC在启动子区域二聚化形成环阻断转录。

#### 概述 pCS载体系统是用于在大肠杆菌中低温（通常15℃）高效表达重组蛋白的系统。该载体系统基于大肠杆菌冷休克基因cspA和部分lac操纵子，是pET和pBAD系统（两者是在37℃表达）的补充。 温度与重组蛋白质的折叠有关，从而影响蛋白的溶解度和稳定性。因此，许多在37℃下溶解度和稳定性较差的蛋白，能在较低温度下有所改善。当重组蛋白37°C诱导表达的pET或pBAD载体系统中表达困难时，pCS系统可能是一种非常有用的替代方法。 将目的基因置于pCS载体中cspA启动子、lac操纵子（LacO）和cspA的5'UTR和短翻译增强元件（TEE）的下游。 由于在37℃下5'UTR非常不稳定，cspA启动子在此温度下的转录非常低效。但当将宿主菌转移至15℃时，5'UTR会形成高度稳定的二级结构。TEE序列可以通过核糖体的捕获来增强目的基因的翻译起始。 该质粒还携带有LacI天然启动子和编码序列，LacI蛋白作用于邻近cspA启动子的LacO序列以阻断目的基因的转录。在不存在IPTG的情况下，这种抑制作用可以阻止下游基因的泄漏表达，而加入IPTG则会阻断LacI的抑制作用。

#### 概述 pET载体系统是用于在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能强大且广泛使用的系统，载体上的噬菌体T7强启动子能够调控目的基因的转录和翻译。细胞内存在T7 RNA聚合酶时，重组蛋白的表达被激活。当处于完全诱导状态时，几乎所有细胞资源都会致力于表达目的蛋白，仅需几个小时的诱导，目的蛋白的表达量就可以占细胞总蛋白的一半。 关于该载体系统的更多信息，请参考以下文献。 参考文献 | 主题 ---|--- Methods Enzymol. 185:60-89 (1990) | Use of T7 RNA polymerase to direct expression of cloned genes. J Mol Biol. 219:45 (1991) | Development of the T7lac promoter system. #### 亮点 首先，在缺乏T7 RNA聚合酶基因的宿主菌中，将目的基因克隆到pET载体上，这样可以以防止重组毒性蛋白的表达引起的质粒不稳定性。