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## 概述 pET载体系统是用于在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能强大且广泛使用的系统，载体上的噬菌体T7强启动子能够调控目的基因的转录和翻译。细胞内存在T7 RNA聚合酶时，重组蛋白的表达被激活。当处于完全诱导状态时，几乎所有细胞资源都会致力于表达目的蛋白，仅需几个小时的诱导，目的蛋白的表达量就可以占细胞总蛋白的一半。 关于该载体系统的更多信息，请参考以下文献。 参考文献 | 主题 ---|--- Methods Enzymol. 185:60-89 (1990) | Use of T7 RNA polymerase to direct expression of cloned genes. J Mol Biol. 219:45 (1991) | Development of the T7lac promoter system. ## 亮点 首先，在缺乏T7 RNA聚合酶基因的宿主菌中，将目的基因克隆到pET载体上，这样可以以防止重组毒性蛋白的表达引起的质粒不稳定性。

## 概述 我们的毕赤酵母重组蛋白表达载体系统有着非常强大高效的重组蛋白表达能力。毕赤酵母作为一种甲基营养型酵母，被广泛应用在蛋白产品的研究和工业应用上。 在该载体系统中，目的基因通常被克隆在甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子（GAP）和乙醇氧化酶1启动子（AOX1）的下游，这取决于基因的基本结构和表达诱导条件的要求。GAP是一个强大的组成型启动子，而AOX1则是受甲醇严格高效调控的启动子，这两个启动子都能够介导目的基因的高水平表达，目的蛋白的累加总量往往可达总细胞可溶性蛋白的30%以上。一般来说，GAP启动子的表达能力略强于诱导状态下的AOX1启动子。我们建议您做一个时间曲线测试，以确定表达目的蛋白的最佳启动子类型。 与酿酒酵母不同的是，毕赤酵母以甲醇为基础碳源，能更高水平地介导重组蛋白的表达（通常是酿酒酵母的的10-100倍）。另外，毕赤酵母和酿酒酵母在技术上有许多共通之处（如互补作用），通用的基因注释和遗传命名法简化了两个物种的研究。 关于该载体系统的更多信息，请参考以下文献。

## 概述 pBAD载体系统是用于在细菌中表达重组蛋白的可靠且可控的系统，该系统通过araBAD操纵子控制大肠杆菌L- 阿拉伯糖的代谢。将目的基因置于pBAD载体中araBAD启动子的下游，当L- 阿拉伯糖存在时，araBAD启动子驱动目的基因的高效表达；当葡萄糖存在时，目的基因的表达则被抑制。该载体系统可精确控制目的基因的表达，特别适用于生产困难蛋白，如具有毒性或不溶性蛋白。 关于该载体系统的更多信息，请参考以下文献。 参考文献 | 主题 ---|--- J Bacteriol. 177:4121-30 (1995) | Development of pBAD vectors ## 亮点 首先，将目的基因克隆到pBAD载体上，并将携带该质粒的菌株在缺乏L-阿拉伯糖的生长培养基中培养以降低质粒不稳定性。然后，通过向培养基中加入L- 阿拉伯糖来诱导目的基因的表达。 我们的pBAD载体上携带的双向araBAD启动子可同时驱动目的基因和调节蛋白AraC的表达。在缺少L- 阿拉伯糖的情况下，AraC在启动子区域二聚化形成环阻断转录。