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## 概述
杆状病毒载体系统广泛应用于昆虫细胞中表达重组蛋白，它是真核表达重组蛋白最通用和最强大的系统之一。该系统特别有利于在真核宿主细胞中大规模制备重组蛋白。许多真核生物蛋白的翻译后修饰只能在真核细胞中发生（例如糖基化），或者需要真核细胞环境来进行正确折叠（例如膜蛋白质），而原核蛋白表达系统却没有这些功能。
杆状病毒是一种双链DNA病毒，通常会感染昆虫，特别是鳞翅目昆虫（moths, butterflies and
skippers）。我们的克隆载体pBV是经优化的，可与来自AcMNPV（Autographa californica multicapsid
nucleopolyhedrovirus）的穿梭载体（称为Bacmid）一起使用，该穿梭载体的野生型基因组大小为134 kb。
首先将目的基因克隆到含有强启动子的pBV载体上，目的基因表达盒与庆大霉素抗性基因的侧翼序列为Tn7转座子末端元件Tn7L和Tn7R。然后，将该载体转化到携带Bacmid穿梭载体和辅助质粒的大肠杆菌中。...
## 概述
利用嵌合抗原受体 (Chimeric antigen receptor，CAR) 载体生产可识别肿瘤相关抗原的工程T细胞（也称为CAR-
T细胞）已成为一种极富前景的癌症治疗工具。在 CAR-
T细胞免疫疗法中，来自患者（自体）或健康供体（同种异体）的T细胞经过改造表达CAR。CAR受体可以靶向识别肿瘤细胞表面抗原，活化T细胞使其发挥免疫作用以帮助杀伤肿瘤细胞。
CAR受体的结构由四个主要部分组成：（1）一个胞外抗原识别结构域，由已知特异性的抗体的单链可变区片段 (Single chain variable
fragment，scFv) 组成。
scFv促进抗原结合，包含一个轻链可变区片段和一个特异的单克隆抗体的重链片段，两者通过一个柔性的肽链相连；（2）一个位于胞外的铰链区或间隔区，将scFv与CAR的跨膜结构域连接起来，并为CAR的结构提供灵活性和稳定性；（3）跨膜结构域，将CAR锚定在质膜上，从而将胞外的铰链区和抗原结合结构域同细胞内结构域关联起来。...
## 概述
CRISPR/Cas9（成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9）系统极大地促进了多种物种的体外和体内基因抑制实验。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22
nt的同源靶序列直接相互作用提供靶向特异性。gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。Cas9扫描基因组并切割与gRNA互补的序列，前提是这些序列跟随着一段NGG前间区序列邻近基序（PAM）。双链DNA断裂随后被HDR或者NHEJ途径修复，从而产生不同大小长度的位点突变（碱基插入或缺失）。
使用一个一体化的同时表达Cas9和gRNA的载体，或者分开表达Cas9和gRNA的载体，可以方便地在线虫中进行CRISPR/Cas9编辑。该载体系统属于后者，包含一个线虫密码子优化的U6启动子驱动表达的gRNA。该载体可以被注射到线虫的远端性腺，然后进入生殖细胞细胞核。使用该载体注射的线虫可以表达Cas9。筛选突变后代，获得突变可遗传的基因敲除线虫品系。
关于该载体系统的更新信息，请参考以下文献。...
## 概述
在哺乳动物细胞和动物中，该常规质粒FLEX（Flip-Excision）条件性基因表达载体系统Cre-
switch，通过Cre重组酶条件性控制两个ORF的表达。FLEX Cre-switch系统利用位于两个平行反向ORF两侧的Lox-
变体重组位点，在Cre重组酶的调控下失活一个目的基因的表达，而激活另一个目的基因表达。
FLEX Cre-switch系统由两对异型Lox-变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于两个基因ORF的两侧。
两个ORF相互反向，其中一个ORF具有正确的读码方向（相对于启动子）。两种Lox-变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-
变体不能进行重组。LoxP和Lox2272位点以交替方式位于两个ORF两端，每对位点互为反向。Cre重组酶不存在的情况时，第一个ORF由于其编码方向与启动子方向相同，可以在客户定制的启动子驱动下正常表达，而第二个ORF由于其方向相反则无法正常表达。...
## 概述
CRISPR/Cas9核酸酶表达载体是当前几种流行的基因编辑工具之一，可以快速有效地在基因组靶序列上创造突变（其它两种常见的工具是ZFN和TALEN）。
Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22
nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。
使用CRISPR打靶目的基因需要目标细胞同时表达Cas9和特异gRNA。这可以通过在同一个载体上共表达Cas9和gRNA，也可以通过在两个载体各上自表达Cas9和gRNA来实现。使用Cas9和gRNA两个载体分开表达的优势在于可使用不同的gRNA与不同的Cas9变体组合（如Cas9n，dCas9），从而带来更多变的实验方案。
我们的常规Cas9表达质粒载体可以直接转染哺乳动物细胞，方法如同大多数实验室的传统转染方法一样，操作上非常简便。...
## 概述
常规非编码RNA表达质粒载体是在多种哺乳动物细胞中转染和表达非编码RNA的高效工具。非编码RNA是一类长度小于30个核苷酸或者大于200个核苷酸的功能性RNA，包括：小分子RNA（micro
RNA, miRNA）、小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）、Piwi蛋白互作RNA（piwi-interacting
RNA, piRNA）,小核RNA（small nuclear RNA, snRNA）、核仁小RNA（small nucleolar RNA,
snoRNA）、基因间长链非编码RNA （large intergenic non-coding RNA,
lincRNA）、内含子长链非编码RNA（intronic long non-coding RNA, intronic
lncRNA）、天然反义转录物（natural antisense transcripts, NAT）、增强子RNA（enhancer RNA ,
eRNA）和启动子相关RNA（promoter-associated RNA ,
PAR）等。...
## 概述
通俗名称： scAAV shRNA干扰载体，scAAV shRNA knockdown vector
VB系统名称： 哺乳动物shRNA干扰scAAV载体，mammalian shRNA knockdown scAAV vector
我们的scAAV（self-complementary adeno-associated
virus，中文名为双链腺相关病毒或者自我互补腺相关病毒）shRNA干扰载体系统是一种有效敲低哺乳动物蛋白基因表达水平的工具，可用于体外培养细胞、动物体内实验。
scAAV 是基于ssAAV（adeno-associated
virus，中文名为腺相关病毒，简称AAV或者ssAAV）改造而成的一种病毒基因组是自我互补型双链DNA的AAV。由于野生型的AAV的病毒基因组是single-
stranded DNA，与scAAV区分时，往往写成ssAAV。...
#### 概述
在生物医学领域，利用常规转染将质粒载体转到哺乳动物细胞中是使用最广泛的方法。虽然近年来开发了不少更为先进的基因导入载体系统（如慢病毒载体、腺病毒载体、AAV载体和PB转座子载体等），但常规质粒基因表达载体仍被大多数实验室使用，这主要得益于其在技术上的简便性以及在各种类型细胞中的高效转染率。常规质粒载体转染的关键特点是短暂性，并且在宿主基因组中的整合效率非常低（通常小于1%）。
关于常规质粒基因表达载体的更多信息，请参考以下文献。
参考文献 | 主题
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Mol Biotechnol. 16:151 (2000) | Overview of vector design for mammalian gene expression
EMBO J. 12:2539 (1993) | Transcription blocker prevent transcriptional interference
#### 亮点
我们的载体系统已经过优化，其在大肠杆菌中具有高拷贝复制能力，且对细胞具有高效转染率。...
## 概述
将常规质粒载体导入植物细胞原生质体是一种广泛的使用方法，可通过化学转化或电转完成。虽然已经开发了其他基因表达载体系统（如双元载体），但常规质粒基因表达载体仍被大多数实验室使用，这主要得益于其在技术上的简便性以及在植物细胞中的高效转染率。常规质粒载体转染的关键特点是短暂性，并且在宿主基因组中的整合效率非常低（通常小于1%）。
关于该载体系统的更多信息，请参考以下文献。
参考文献 | 主题
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Biolistic and other non-Agrobacterium technologies of plant transformation, In Plant Biotechnology and Agriculture. Academic Press, San Diego, 2012, Pages 117-129 | Overview of plant transgenic methods using regular plasmid vectors....
它在增强受体表达和稳定性方面起着关键作用；（4）胞内信号域，通常源自T细胞受体的CD3
zeta 链并包含免疫受体酪氨酸激活基序（Immunoreceptor tyrosine-based activation
motif，ITAM)。抗原结合CAR后，ITAM被磷酸化并激活下游信号传导，从而导致T细胞的后续活化。此外，该胞内结构域还可以引入一个或多个与CD3
zeta信号域串联的共刺激域（来源于CD28、CD137等），以改善T细胞增殖效率和活化的持久性。
CAR的结构在过去几年中随着对胞内结构域的修改而不断发展。第一代CAR仅包含一个衍生于CD3
zeta链的信号域。虽然这种CAR可以激活T细胞，但是由于表达此类CAR的T细胞的细胞毒性和增殖能力偏低，它们在体内的抗肿瘤活性并不理想。第二代CAR除了包含一个CD3
zeta信号域，还具有一个胞内的共刺激域，因此表达第二代CAR的T细胞显著改善了其体内增殖能力、扩增能力和活化的持久性。为了进一步优化CAR
T细胞的抗肿瘤功效，第三代CAR除了CD3
zeta外，还引入了两个胞内顺式作用的共刺激结构域。...
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