搜索“微载体细胞培养榜篯端游捏脸吗 sitezhidaobaiducom”得到83个结果，以下为结果51-60
## 概述
CRISPR/Cas9（规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9）核酸酶表达载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一（另外两种是ZFN和TALEN），可在基因组的靶位点快速有效地产生突变。这些质粒载体编码的特异性RNA，能够引导DNA核酸酶（或缺刻酶）编辑基因组中特定位点的DNA序列。
Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22
nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。为了方便使用，我们设计的CRISPR/Cas9载体能够在一个载体上同时有效表达Cas9核酸酶（或缺刻酶）和引导RNA（gRNA）。
使用CRISPR打靶目的基因需要目标细胞同时表达Cas9和特异gRNA。这可以通过在同一个载体上共表达Cas9和gRNA，也可以通过在两个载体各上自表达Cas9和gRNA来实现。...
ttTi5605基因座表达载体是一种经过良好验证的可用于线虫的特定位点的外源基因单拷贝插入的高效系统。该系统使用Mos1转座子剪切机制或CRISPR机制向线虫引入稳定整合的外源基因插入。
Mos1转座子首先在果蝇（Drosophila
mauritiana）中被发现。当前，相当一部分的线虫种属已经被开发出包含确定的Mos1转座子插入位点。一个例子是基因组ttTi5605区域包含了Mos1位点的线虫种属。使用ttTi5605基因座的原因在于在该区域插入序列不会扰乱临近基因的功能。此外，Mos1转座子剪切技术可以将外源基因以单拷贝的方式插入基因组，不容易被线虫自身的RNAi系统沉默（重复元件序列通常易被细胞转录抑制）。Mos1介导的ttTi5605位点的基因特异性重组需要ttTi5605基因座表达载体与一个表达转座酶的辅助质粒共转染线虫。通过热激法可以激活转座酶活性，从而导致Mos1转座子在线虫基因组发生剪切。断开的DNA双链可以被外部提供的序列修复并产生稳定的基因重组。...
## 概述
FLEX条件性表达慢病毒载体结合了载体家的高效的第三代慢病毒载体系统和Cre响应的FLEX条件性基因表达载体，帮助您实现在病毒宿主基因组上永久整合Cre重组酶响应的FLEX
Cre-On基因调控开关。FLEX Cre-On系统利用位于目的基因两侧的Lox-
变体重组位点，在Cre重组酶的调控下目的基因发生反转，目的基因正常表达；而Cre不存在的情况下，目的基因不表达。
FLEX Cre-On系统由两对异型Lox-
变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于反向基因ORF（相对启动子方向而言）的两侧。 两种Lox-
变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-变体不能进行重组。
LoxP和Lox2272位点以交替方式位于ORF两端，每对位点互为反向。...
Plasmids carrying this origin exist in
high copy numbers in E. coli.
## 概述
FLEX条件性表达慢病毒载体结合了载体家的高效的第三代慢病毒载体系统和Cre响应的FLEX条件性基因表达载体，帮助您实现在病毒宿主基因组上永久整合Cre重组酶响应的FLEX
Cre-Off基因调控开关。FLEX Cre-Off系统利用位于目的基因两侧的Lox-
变体重组位点，在Cre重组酶的调控下目的基因发生反转，目的基因正常表达；而Cre不存在的情况下，目的基因不表达。
FLEX Cre-Off系统由两对异型Lox-变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于ORF的两侧。 两种Lox-
变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-变体不能进行重组。
LoxP和Lox2272位点以交替方式位于ORF两端，每对位点互为反向。Cre重组酶不存在的情况下，客户定制的启动子可以驱动目的基因的正常表达。...
## 概述
我们的腺相关病毒（adeno-associated
virus，简称AAV）shRNA干扰载体系统是一种非常高效的能稳定在体内和体外干扰各种哺乳动物细胞靶基因表达的载体工具。AAV的免疫原性极低，在体内几乎没有致病性，使得AAV成为许多动物研究的理想工具。
AAV重组载体构建完成后与辅助质粒一起转染进入包装细胞。在包装细胞中，位于两个反向重复序列（ITRs）之间的DNA片段与辅助质粒表达的病毒蛋白进一步包装成病毒颗粒。当病毒转导宿主细胞时，两个ITR之间的外源DNA及病毒基因组一起进入细胞，线性双链DNA基因组以游离DNA的形式存在于细胞核中。由人类U6启动子驱动表达的shRNA将会导致靶基因mRNA的降解。
在大多数情况下，可以在生物安全1级（BSL1）设施中处理AAV。AAV是复制缺陷型的、不会引起炎症反应和引发人类疾病。
人们已从自然界中鉴定出许多AAV病毒株，根据病毒表面衣壳蛋白的不同抗原将它们分成不同的血清型。不同血清型的病毒具有不同的组织亲和性（即感染组织特异性）。当我们的AAV载体使用不同的衣壳蛋白包装病毒时，则会赋予病毒不同的血清型。...
## 概述
LEX条件性表达慢病毒载体结合了载体家的高效的第三代慢病毒载体系统和Cre响应的FLEX条件性基因表达载体，可以帮助您实现在多种多样的哺乳动物细胞中以慢病毒转导Cre响应的FLEX基因表达调控开关。FLEX
Cre-Switch系统的两个Lox-
变体重组位点之间包含一对反向平行的ORF，在Cre重组酶的调控下ORF上的两个目的基因编码方向反转，从而让一个目的基因从激活表达变成沉默，另一个目的基因从沉默变成激活表达。
FLEX Cre-switch系统由两对异型Lox-变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于两个基因ORF的两侧。
两个ORF相互反向，其中一个ORF具有正确的读码方向（相对于启动子）。两种Lox-变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-
变体不能进行重组。LoxP和Lox2272位点以交替方式位于两个ORF两端，每对位点互为反向。Cre重组酶不存在的情况时，第一个ORF由于其编码方向与启动子方向相同，可以在客户定制的启动子驱动下正常表达，而第二个ORF由于其方向相反则无法正常表达。...
## 概述
FLEX介导条件性表达腺病毒载体结合了载体家的高效的腺病毒载体系统和Cre响应的FLEX条件性基因表达载体，可以帮助您实现在多种多样的哺乳动物细胞中以腺病毒转导Cre响应的FLEX基因表达调控开关。FLEX
Cre-On系统利用位于目的基因两侧的Lox-
变体重组位点，在Cre重组酶的调控下目的基因发生反转，目的基因正常表达；而Cre不存在的情况下，目的基因不表达。
FLEX Cre-On系统由两对异型Lox-
变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于反向基因ORF（相对启动子方向而言）的两侧。 两种Lox-
变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-变体不能进行重组。
LoxP和Lox2272位点以交替方式位于ORF两端，每对位点互为反向。...
## 概述
FLEX条件性表达腺病毒载体结合了载体家的高效的腺病毒载体系统和Cre响应的FLEX条件性基因表达载体，可以帮助您实现在多种多样的哺乳动物细胞中以腺病毒转导Cre响应的FLEX基因表达调控开关。FLEX
Cre-Off系统利用位于目的基因两侧的Lox-变体重组位点，在Cre重组酶的调控下目的基因发生反转，目的基因表达被抑制。
FLEX Cre-off系统由两对异型Lox-变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于ORF的两侧。 两种Lox-
变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-变体不能进行重组。
LoxP和Lox2272位点以交替方式位于ORF两端，每对位点互为反向。Cre重组酶不存在的情况下，客户定制的启动子可以驱动目的基因的正常表达。Cre重组酶存在的情况下，LoxP和Lox2272位点对分别重组，导致ORF方向反转为反向，且其中的一对重组位点将具有相同的方向，Cre会介导产生正向重组切割，继而分别留下一个不同的重组位点。ORF方向的反转，使得目的基因无法正常表达。...
在自然界中，细菌利用CRISPR/Cas抵抗质粒和噬菌体等外源遗传物质的入侵，从而保持自身基因组的完整性。
两个生物大分子，Cas9蛋白和gRNA（guide
RNA）组成了CRISPR/Cas9基因编辑系统。在细胞内，Cas9蛋白与gRNA形成复合物，能特异性鉴别出靶序列。此过程中，Cas9蛋白负责将复合物定点到靶DNA和剪切靶DNA。Cas9蛋白有6个结构域，分别是Rec
I、Rec II、Bridge Helix、PAM Interacting、HNH和RuvC。Rec
I是6个中最大的一个结构域，负责结合gRNA。一旦结合了靶DNA，Bridge Helix就负责启动剪切。PAM
interacting结构域赋予Cas9对PAM序列的特异性要求，负责启动与靶DNA的结合。HNH和RuvC都是核酸酶结构域，剪切单链DNA。
图1. Cas9蛋白结构域
在没有结合gRNA的情况下，Cas9蛋白保持失活状态。gRNA是一条单链RNA，会形成一个T型结构。在这个T结构里，有几个显著的特征：tetraloop、3个stem
loop和5' 端与靶DNA互补的序列。...
## 概述
我们的pUASTattB载体系统是一个高效的转基因果蝇制备和基因表达控制系统。该系统利用噬菌体φC31整合酶介导的重组实现靶向基因有效插入，并结合强大的诱导型启动子Gal4调节转基因表达。pUASTattB载体系统类似于pUAST系统，然而它是利用φC31整合酶介导重组而不是基于P元件的转座实现目的基因的插入。
噬菌体φC31整合酶能高效介导噬菌体附着位点（称为attP）和细菌附着位点（称为attB）之间的序列特异性重组。与基于转座子系统（如P元件介导的重组）相反，φC31介导的插入是不可逆的。pUASTattB整合到attP位点后会产生两个新的位点（attL和attR），新的位点将不再被φC31整合酶识别。另外，基于φC31的插入是具有位点特异性的，通常仅在attP位点发生。基于这个原因，pUASTattB载体系统通常用于携带attP"着陆位点"的果蝇系。
pUASTattB系统包含两个载体，一个称为pUASTattB载体或是携带attB位点和目的基因的φC31供体载体；另一个为编码φC31整合酶的辅助载体。...
服务商工作站 >>
