载体家 | 让科研更佳

哺乳动物miR30-shRNA干扰慢病毒载体

## 概述慢病毒miR30 shRNA干扰载体系统是用于多种哺乳动物细胞中，高效干扰靶基因表达的方法。当病毒基因组被逆转录并永久整合到宿主细胞基因组时，用户定制的启动子会驱动包含目的基因和一个或多个基于miR30的靶向目的基因的shRNA（shRNAmiR）多顺反子的表达。 shRNAmiR转录物通过胞内micro-RNA途径加工产生成熟的shRNA，促进靶基因mRNA的降解。 Learn more >> 与常规shRNA载体（利用RNA聚合酶III启动子如U6介导shRNA的表达）不同，基于miRNA的shRNA干扰载体系统采用了标准RNA聚合酶II启动子，这使得可以运用组织特异性，诱导型或可变强度的启动子进行实验，而组成型U6启动子则无法实现。 RNA聚合酶II启动子具有能够有效转录长转录物的能力，相对于其他干扰载体系统拥有许多额外的优势。首先，多个shRNAmiR可以作为单个多顺反子进行转录，在细胞内加工成成熟的shRNA，这使得单个转录物能同时干扰多个基因或靶向相同基因内的多个区域。...

哺乳动物基因表达载体

## 概述在生物医学领域，利用常规转染将质粒载体转到哺乳动物细胞中是使用最广泛的方法。虽然近年来开发了不少更为先进的基因导入载体系统（如慢病毒载体、腺病毒载体、AAV载体和PB转座子载体等），但常规质粒基因表达载体仍被大多数实验室使用，这主要得益于其在技术上的简便性以及在各种类型细胞中的高效转染率。常规质粒载体转染的关键特点是短暂性，并且在宿主基因组中的整合效率非常低（通常小于1%）。关于常规质粒基因表达载体的更多信息，请参考以下文献。参考文献 | 主题 ---|--- Mol Biotechnol. 16:151 (2000) | Overview of vector design for mammalian gene expression EMBO J. 12:2539 (1993) | Transcription blocker prevent transcriptional interference ## 亮点我们的载体系统已经过优化，其在大肠杆菌中具有高拷贝复制能力，且对细胞具有高效转染率。...

果蝇基因表达载体pUAST

## 概述我们的pUAST载体系统是一个良好、高效的转基因果蝇制备和基因表达控制系统。该系统来源于常用的果蝇P元件转座子，结合强诱导型启动子Gal4以调节转基因表达。完整的pUAST系统包含两个载体，一个载体被称为pUAST质粒，包含两个P元件末端重复，包括待转座的区域或基因；另一个载体称为辅助质粒或转座酶质粒，编码P转座酶。当pUAST与转座酶质粒共转染靶细胞时，辅助质粒产生的转座酶识别pUAST质粒上的两个P元件末端重复序列，然后将待转座区和两个P元件末端重复序列插入到宿主基因组中。 P元件属于II类转座子，通过"剪切--粘贴"的机制移动，从一个地方转座到另一个地方，而不留下序列本身（恰好相反，I类转座子是通过"复制-- 粘贴"的方式移动），在每一个插入位点都会产生一个8 bp的正向重复序列。通过将pUAST和辅助质粒共注射到果蝇早期胚胎中可以产生转基因果蝇。P转座酶介导两个P元件末端重复序列之间的重组导致生殖系重组交换，以致产生携带靶基因的转基因后代。P转座酶仅在短时间内表达，并且随着辅助质粒的丢失，转座子在宿主基因组中的整合便成为永久性的。...

RCAS基因表达载体

## 概述 RCAS（Replication-Competent Avian Sarcoma-Leukosis Virus Long Terminal Repeat with a Splice Acceptor）是一种源自具有复制能力的Rous肉瘤病毒（Rous Sarcoma Virus, RSV）的逆转录病毒载体。该载体具备剪切受体以及禽肉瘤- 白血病病毒（ASLV）的长末端重复序列（LTR）。野生型RSV保留了所有必要的病毒基因以及原癌基因src。在RCAS载体里，src原癌基因被移除，并由目的基因替代，但仍保留了src的剪接位点，由此插入的目的基因能够在LTR的驱动下，通过剪接形成病毒转录本进而实现表达。RCAS载体在合适的禽类细胞中依旧具备复制能力，并且能够感染表达禽类病毒受体的哺乳动物细胞。 RCAS表达载体RCASBP(A)，是基于Bryan Polymerase（BP）株的RSV病毒基因组序列构建而成。该毒株属于A亚群，拥有能与TVA受体特异性结合的包膜蛋白。与普通RCAS相比，RCASBP株在鸡细胞中有更高的复制效率。...

RCAS基因表达载体

## 概述 RCAS（Replication-Competent Avian Sarcoma-Leukosis Virus Long Terminal Repeat with a Splice Acceptor）是一种源自具有复制能力的Rous肉瘤病毒（Rous Sarcoma Virus, RSV）的逆转录病毒载体。该载体具备剪切受体以及禽肉瘤- 白血病病毒（ASLV）的长末端重复序列（LTR）。野生型RSV保留了所有必要的病毒基因以及原癌基因src。在RCAS载体里，src原癌基因被移除，并由目的基因替代，但仍保留了src的剪接位点，由此插入的目的基因能够在LTR的驱动下，通过剪接形成病毒转录本进而实现表达。RCAS载体在合适的禽类细胞中依旧具备复制能力，并且能够感染表达禽类病毒受体的哺乳动物细胞。 RCAS表达载体RCASBP(A)，是基于Bryan Polymerase（BP）株的RSV病毒基因组序列构建而成。该毒株属于A亚群，拥有能与TVA受体特异性结合的包膜蛋白。与普通RCAS相比，RCASBP株在鸡细胞中有更高的复制效率。...

哺乳动物shRNA干扰PB转座子载体

## 概述我们的PB转座子shRNA干扰载体系统是一种可稳定干扰多种细胞类型靶基因表达的简单而有效的方法。这种基于转座子的系统利用质粒转染（非病毒转导）将shRNA表达盒永久地整合到宿主细胞基因组中，由人类U6启动子驱动表达的shRNA将会导致靶基因mRNA的降解。与合成siRNA相比，PB转座子shRNA干扰具有明显的优势（见下文载体优势）。 PB转座子shRNA干扰载体系统包含两个载体，一个载体被称为辅助质粒，负责编码转座酶；另一个载体被称为转座子质粒，包含两个末端重复序列（TRs）以及两者之间的被转座区域，shRNA表达盒就克隆在这个区域。当辅助质粒和转座子质粒共转染靶细胞时，辅助质粒产生的转座酶将会识别转座子的两个TR元件，然后将被转座区和两个TR元件插入到宿主基因组中。转座插入通常发生在包含TTAA序列的宿主染色体位点，并在转座子两侧出现TTAA重复序列。PB转座子属于II类转座子，通过"剪切 --粘贴"的机制移动，从一个地方转座到另一个地方，而不留下序列本身（恰好相反，I类转座子是通过"复制-- 粘贴"的方式移动）。...

哺乳动物CRISPR（单gRNA）表达质粒载体

## 概述 CRISPR/Cas9（规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9）核酸酶表达载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一（另外两种是ZFN和TALEN），可在基因组的靶位点快速有效地产生突变。这些质粒载体编码的特异性RNA，能够引导DNA核酸酶（或缺刻酶）编辑基因组中特定位点的DNA序列。 Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。为了方便使用，我们设计的CRISPR/Cas9载体能够在一个载体上同时有效表达Cas9核酸酶（或缺刻酶）和引导RNA（gRNA）。我们的CRISPR/Cas9表达载体中有两种Cas9核酸酶供选择，一种是标准的人源化Cas9（hCas9），能够有效地在靶位点产生双链断裂（DSBs）；另一种是"缺刻酶"（Cas9_D10A），仅在DNA中产生单链切割。...

gRNA打靶效率检测载体

## 概述 CRISPR/Cas9载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一，可以快速有效地在基因组的靶位点产生突变（另外两种应用广泛的是ZFN和TALEN）。这些质粒载体编码序列特异性RNA介导的DNA核酸酶（或切口酶），可用于编辑基因组中特定位点的DNA序列。 Cas9属于RNA引导的DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抗性。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用提供靶向特异性。gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。常规质粒gRNA特异性检测载体设计用于测试CRISPR/Cas9对一个或多个gRNA靶序列的切割效率。该系统允许用户通过比对多个gRNA靶位点来筛选出最有效的CRISPR/Cas9靶点。常规质粒gRNA特异性检测载体系统的基础是位于强启动子EF1A下游的无活性且分隔开的EGFP ORF。将待测试的gRNA靶位点克隆在两个不完整的无功能性的EGFP ORF（称为EGFP-L和EGFP-R）之间。...

哺乳动物基因Tet-On诱导表达载体

## 概述 Tet-On诱导型基因表达系统是控制哺乳动物细胞中目的基因定时表达的强大工具。Tet- On诱导型基因表达载体作用：当不存在四环素及其类似物（如doxycycline）的情况下，目的基因几乎或完全沉默；当往体系中添加四环素或其他类似物（如doxycycline）时，目的基因得到快速高水平表达。这是通过多组分系统实现的，即四环素不存在的情况下，tTS蛋白使得基因沉默；四环素存在的情况下，rtTA蛋白使得基因正常表达。在生物医学领域，利用常规转染将质粒载体转到哺乳动物细胞中是使用最广泛的方法。虽然近年来开发了不少更为先进的基因导入载体系统（如慢病毒载体、腺病毒载体、AAV载体和PB转座子载体等），但常规质粒基因表达载体仍被大多数实验室使用，这主要得益于其在技术上的简便性以及在各种类型细胞中的高效转染率。常规质粒载体转染的关键特点是短暂性，并且在宿主基因组中的整合效率非常低（通常小于1%）。关于该载体系统的更多信息，请参考以下文献。...

哺乳动物单gRNA表达慢病毒载体

## 概述 CRISPR/Cas9（规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9）核酸酶表达载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一（另外两种是ZFN和TALEN），可在基因组的靶位点快速有效地产生突变。慢病毒single gRNA表达载体系统可以在转导的细胞内表达单个引导RNA（gRNA），当与Cas9核酸酶共表达时，可编辑基因组中特定靶位点的DNA序列。该载体需要与另一种编码Cas9核酸酶的载体一起使用。 Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。为了方便使用，我们设计的CRISPR/Cas9载体能够在一个载体上同时有效表达Cas9核酸酶（或缺刻酶）和引导RNA（gRNA）。...

帮助