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哺乳动物gRNA/MS2表达慢病毒载体

## 概述 CRISPR/Cas9载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一，可以快速有效地在基因组的靶位点产生突变（另外两种应用广泛的是ZFN和TALEN）。 Cas9属于RNA引导的DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抗性。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用提供靶向特异性。gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。协同激活介质（SAM）系统是用于转录激活内源性基因的强大工具。该系统源自CRISPR/Cas9基因组编辑系统，但不具有基因组编辑功能，是一种可指导在靶位点进行多组分转录激活复合物（SAM复合物）组装的修饰型gRNA。通常，SAM复合物的组装足以诱导靶位点强烈的转录激活。展开 >> 完整的SAM系统包含三个组分，每个组分分别由单独的慢病毒载体提供：gRNA/MS2表达载体，MS2/P65/HSF1和dCas9/VP64辅助载体。将用户定制的gRNA序列克隆到gRNA/MS表达载体。...

哺乳动物CRISPR（双SagRNA表达）ssAAV载体

## 概述 CRISPR/Cas9（规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9）核酸酶表达载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一（另外两种是ZFN和TALEN），可在基因组的靶位点快速有效地产生突变。这些质粒载体编码的特异性RNA，能够引导DNA核酸酶（或缺刻酶）编辑基因组中特定位点的DNA序列。 Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。为了方便使用，我们设计的CRISPR/Cas9载体能够在一个载体上同时有效表达Cas9核酸酶（或缺刻酶）和引导RNA（gRNA）。使用CRISPR打靶目的基因需要目标细胞同时表达Cas9和特异gRNA。这可以通过在同一个载体上共表达Cas9和gRNA，也可以通过在两个载体各上自表达Cas9和gRNA来实现。...

哺乳动物CRISPR（双SagRNA表达）ssAAV载体

## 概述 CRISPR/Cas9（规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9）核酸酶表达载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一（另外两种是ZFN和TALEN），可在基因组的靶位点快速有效地产生突变。这些质粒载体编码的特异性RNA，能够引导DNA核酸酶（或缺刻酶）编辑基因组中特定位点的DNA序列。 Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。为了方便使用，我们设计的CRISPR/Cas9载体能够在一个载体上同时有效表达Cas9核酸酶（或缺刻酶）和引导RNA（gRNA）。使用CRISPR打靶目的基因需要目标细胞同时表达Cas9和特异gRNA。这可以通过在同一个载体上共表达Cas9和gRNA，也可以通过在两个载体各上自表达Cas9和gRNA来实现。...

dCas9-KRAB CRISPRi（CRISPR interference）慢病毒载体系统

## 概述 CRISPR/Cas9载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一，可以快速有效地在基因组的靶位点产生突变（另外两种应用广泛的是ZFN和TALEN）。 Cas9属于RNA引导的DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抗性。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用提供靶向特异性。gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。 dCas9-KRAB系统是一种用于内源性基因转录抑制的强大工具。该技术依靠生成一个没有核酸酶活性的Cas9蛋白。向Cas9的RuvC和NHN两个核酸酶结构域分别导入氨基酸突变D10A和H840A，使得Cas9蛋白失去切割DNA活性，但仍保留结合DNA的能力，这样的Cas9 称之为dCas9（Dead Cas9）。展开 >> 当dCas9被引导到某个基因的转录起始位点TSS（transcription start site）时，dCas9能够物理性阻碍RNA聚合酶的通过，导致基因沉默。...

哺乳动物基因Tet-On诱导表达质粒载体（Low leak）

Tet- On诱导型基因表达载体作用：当不存在四环素及其类似物（如doxycycline）的情况下，目的基因几乎或完全沉默；当往体系中添加四环素或其他类似物（如doxycycline）时，目的基因得到快速高水平表达。四环素不存在的情况下时，衍生于TeR（Tet抑制蛋白）和KRAB- AB（Kid-1蛋白转录抑制结构域）的融合蛋白tTS结合TRE启动子，导致基因转录抑制。另一方面，四环素存在时，衍生于突变型Ter抑制蛋白和VP16蛋白（转录激活结构域）的融合蛋白rtTA结合TRE启动子，激活基因转录。除了以tTS和rtTA融合蛋白作为基因转录激活的开关的标准Tet-On载体系统，我们还提供专门为组织特异表达设计低泄露型（Low leak）Tet- On载体系统。这种实验通常要求在靶组织处四环素存在，而非靶组织处无四环素作用。该载体上存在三个表达盒：1. TRE启动子驱动的GOI表达；2. 通用启动子驱动的tTS基因表达；3. 用户自定义启动子驱动的rtTA基因表达。当四环素不存在时，通用启动子驱动tTS在所有组织中表达。tTS结合TRE启动子，导致GOI在所有组织中的转录抑制。...

哺乳动物单gRNA表达慢病毒载体

## 概述 CRISPR/Cas9（规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9）核酸酶表达载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一（另外两种是ZFN和TALEN），可在基因组的靶位点快速有效地产生突变。慢病毒single gRNA表达载体系统可以在转导的细胞内表达单个引导RNA（gRNA），当与Cas9核酸酶共表达时，可编辑基因组中特定靶位点的DNA序列。该载体需要与另一种编码Cas9核酸酶的载体一起使用。 Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。为了方便使用，我们设计的CRISPR/Cas9载体能够在一个载体上同时有效表达Cas9核酸酶（或缺刻酶）和引导RNA（gRNA）。...

哺乳动物Cas9表达质粒载体

## 概述 CRISPR/Cas9核酸酶表达载体是当前几种流行的基因编辑工具之一，可以快速有效地在基因组靶序列上创造突变（其它两种常见的工具是ZFN和TALEN）。 Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22 nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。使用CRISPR打靶目的基因需要目标细胞同时表达Cas9和特异gRNA。这可以通过在同一个载体上共表达Cas9和gRNA，也可以通过在两个载体各上自表达Cas9和gRNA来实现。使用Cas9和gRNA两个载体分开表达的优势在于可使用不同的gRNA与不同的Cas9变体组合（如Cas9n，dCas9），从而带来更多变的实验方案。我们的常规Cas9表达质粒载体可以直接转染哺乳动物细胞，方法如同大多数实验室的传统转染方法一样，操作上非常简便。...

哺乳动物Cas9表达慢病毒载体

## 概述 CRISPR/Cas9（规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白9）核酸酶表达载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一（另外两种是ZFN和TALEN），可在基因组的靶位点快速有效地产生突变。这些质粒载体编码的特异性RNA，能够引导DNA核酸酶（或缺刻酶）编辑基因组中特定位点的DNA序列。 Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。为了方便使用，我们设计的CRISPR/Cas9载体能够在一个载体上同时有效表达Cas9核酸酶（或缺刻酶）和引导RNA（gRNA）。使用CRISPR打靶目的基因需要目标细胞同时表达Cas9和特异gRNA。这可以通过在同一个载体上共表达Cas9和gRNA，也可以通过在两个载体各上自表达Cas9和gRNA来实现。...

哺乳动物基因表达VSV载体

VSV病毒载体可以高效地利用异源病毒的包膜蛋白进行假型化（Presudotypted），比如那些需要在高生物安全等级实验室操作的病毒的包膜蛋白。重组VSV在宿主细胞中不能进行超过一轮的复制，因此可以在生物安全2级（BSL2）实验室进行相关操作。这些特点促使VSV病毒载体成为在无需高度隔离下研究高风险病毒侵入细胞机制的理想选择。野生型VSV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae），拥有一条单链负义RNA基因组，并且其复制依赖病毒的RNA依赖的RNA聚合酶（RNA- dependent RNA polymerase，RdRp）。VSV的单链RNA基因组编码以下五种蛋白组分：核蛋白（N）、磷酸化蛋白（P）、基质蛋白（M）、糖蛋白（G）和病毒RdRp的大亚基（L）。VSV病毒颗粒中，其RNA基因组与N核蛋白组成核糖核酸蛋白（Ribonucleoprotein，RNP）。P和L蛋白则组成RdRp，并结合于RNP。VSV感染靶细胞时，其G糖蛋白诱导细胞发生内吞作用，帮助病毒侵入细胞。G糖蛋白可以介导病毒包膜与细胞膜融合，促使RNP和RdRp一起释放到细胞质中。...

哺乳动物非编码RNA表达质粒载体

非编码RNA是一类长度小于30个核苷酸或者大于200个核苷酸的功能性RNA，包括：小分子RNA（micro RNA, miRNA）、小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）、Piwi蛋白互作RNA（piwi-interacting RNA, piRNA）,小核RNA（small nuclear RNA, snRNA）、核仁小RNA（small nucleolar RNA, snoRNA）、基因间长链非编码RNA （large intergenic non-coding RNA, lincRNA）、内含子长链非编码RNA（intronic long non-coding RNA, intronic lncRNA）、天然反义转录物（natural antisense transcripts, NAT）、增强子RNA（enhancer RNA , eRNA）和启动子相关RNA（promoter-associated RNA , PAR）等。...