如何计算gRNA特异性分值？

我们使用的gRNA设计和评分使用了 CRISPR文库设计（CLD）中的规则。简而言之，对于每个物种，我们找出符合N₍₂₀₎NGG规则的靶序列，把错配碱基≤3的序列列为潜在的脱靶位点，计算出每个gRNA的脱靶分值，进而得出最终的gRNA特异性分值。gRNA特异性分值在0-100之间，分值越大靶向特异性越高。

请注意特异性分值只是一个参考值。实际的靶向效率和特异性可能会与预测的分值有偏差，低分值的gRNA也可能有较好的靶向效果。