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RCAS逆转录病毒
重组RCAS（含剪接受体位点的复制型禽肉瘤-白血病病毒长末端重复序列）逆转录病毒载体是一种可将目的基因稳定且高效地递送至禽类和经TVA工程改造的哺乳动物系统中的高效工具。该系统为功能研究、发育生物学、药物研发以及构建致癌信号通路模型等领域的体外和体内应用提供了强大且可靠的平台。
订购信息
| 生产规格 | 应用 | 最小滴度 | 分装 | 价格（CNY） | 周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| 超纯化重组RCAS逆转录病毒小量制备 | 细胞培养和体内应用 | >1.0 x 107 TU/mL | 10x10 ul | ￥13,980 | 21-33天 |
| 超纯化重组RCAS逆转录病毒中量制备 | >1.0 x 108 TU/mL | 10x10 ul | ￥25,180 | ||
| 超纯化重组RCAS逆转录病毒大量制备 | >1.0 x 108 TU/mL | 10x100 ul | ￥46,180 |
服务详情
病毒类型
- 对禽肉瘤-白血病病毒A亚群（TVA受体）具有包膜蛋白特异性的 RCAS Bryan聚合酶（BP）毒株；RCASBP(A)
辅助病毒
实现RCAS的成功转导需要靶细胞表达禽类TVA受体。若您的系统不兼容，可购买表达TVA受体的辅助病毒以满足需求。更多详情如下：
| 辅助病毒 | 辅助载体名称 | 辅助载体ID |
|---|---|---|
| TVA表达AAV辅助病毒 | pAAV[FLEXon]-EF1A>LL:rev({TVA:mCherry}) :rev(LL):WPRE | VB010000-9867yez |
| TVA表达辅助慢病毒 | pLV[Exp]-CAG>TVA:IRES:Puro | VB010000-9932acx |
对照病毒
RCAS对照病毒的设计与其定制病毒的生物学应用相匹配，可用于测试定制RCAS病毒的转导效果。例如，若定制病毒过表达某个基因，则所提供的对照病毒即为EGFP对照RCAS（即过表达EGFP的RCAS）。关于对照病毒的详细信息如下：
| 载体系统 | 对照载体名称 | 对照载体ID |
|---|---|---|
| RCAS基因表达系统 | pRCASBPA[Exp]-EGFP | VB010000-9933cap |
运输和储存
我们的RCASBP(A)逆转录病毒存储于HBSS缓冲液中，并采用干冰运输。收到病毒后，请立即放置于-80℃进行长期贮存（至少可稳定保存6个月），或者放置于-20℃并在一周内使用。RCAS病毒的保质期约为一年。请避免反复冻融，因为这会导致病毒滴度大幅下降。
RCAS制备与质量控制
RCAS包装流程如图1所示。携带目的基因（GOI）的表达载体被转染至DF-1鸡细胞中。孵育 3 至 6 天后，先收集一次上清，随后将细胞传代扩增以促进 RCAS 病毒扩增。再次扩增3至5天后，收集含病毒的上清液，并与先前收集的上清液合并。通过 PEG 沉淀法浓缩混合上清后，最终采用蔗糖梯度超速离心法进一步纯化病毒颗粒。
图1 RCAS逆转录病毒的典型生产流程
对于VectorBuilder生产的每个重组RCAS病毒，其质量控制包括：采用TCID50法测定滴度、细菌和真菌的无菌检测以及支原体检测。如果RCAS载体表达荧光蛋白，则我们会在病毒扩增过程中进行荧光转导测试以确认荧光表达情况；如果RCAS载体含有药筛标记，我们则会进行包含药筛的转导测试。此外，针对超纯化RCAS，我们会例行通过内毒素结检测以检查其内毒素水平。如果您需要将内毒素检测结果呈现在相应的COA文件上，我们将收取一定额外费用。其它附加的质量控制服务可根据需求提供。
RCAS载体的主要应用
RCAS 载体能够高效地将基因特异性递送至表达TVA的细胞中，这使其在禽类和哺乳动物系统中具有广泛的应用价值。以下是RCAS载体目前主要应用的一些研究领域：
功能基因组研究
RCAS 系统是研究基因功能、信号通路及遗传相互作用的重要工具。由于 RCAS 能够在禽类模型中实现高效的卵内基因操作，这些载体已被用于在发育组织中引入稳定的基因过表达、实现基因敲低或敲除以及报告基因表达载体的构建。这种特性可让研究人员深入研究特定基因在细胞迁移、谱系追踪和组织形态发生等过程中的作用。
哺乳动物模型中的RCAS靶向感染可将基因、突变体或基因沉默载体递送至特定细胞群中，从而为研究基因功能提供精确的空间控制。这种特异性是通过将TVA受体的表达限制于特定细胞类型来实现的，通常采用转基因小鼠，如Cre-lox小鼠，或采用组织特异性启动子，由此将病毒感染范围限定于选定的细胞群。例如，RCAS-CRISPR /Cas模型可在体内建立体细胞基因敲除模型，无需培育种系敲除小鼠即可进行功能分析。该方法能快速研究基因功能并有利于在组织内进行嵌合遗传操作，特别适用于研究复杂生物系统中的基因相互作用。
图2 RCAS逆转录病毒特异性感染表达TVA的哺乳动物细胞
发育生物学
得益于在胚胎发育早期阶段实现转基因表达的能力，RCAS载体尤其适用于禽类模型中的发育生物学研究。由于该病毒在适宜的禽类细胞中具有复制能力，其扩增过程可通过细胞间传播实现，无需依赖辅助系统。这种特性使其在禽类胚胎模型中表现出强大的应用性能，通过局部感染可实现基因表达的空间与时间精准调控，有助于对体内发育过程如神经图式形成和肢体发育进行研究。
在哺乳动物模型中， RCAS-TVA系统已被用于靶向神经祖细胞、肝祖细胞或造血细胞。 RCASBP(A)载体已被用于在表达TVA的神经干细胞中表达信号调节因子以研究大脑发育，而采用时间控制的RCAS注射则已被用于对发育组织的阶段特异性调控。这些方法最终可让发育研究中能够有效追踪细胞命运与谱系分化。
肿瘤模型
RCAS-TVA系统是一个强大的肿瘤模型平台，其能够以高度细胞类型特异性的方式递送基因。通过将细胞或小鼠进行工程化改造以表达TVA受体（例如在组织特异性启动子控制下），使病毒感染以及后续的基因表达均可被严格限制于特定的细胞群中。这种特性能够在最大限度降低脱靶效应的同时，实现对癌症发展的可控建模。
图3 RCAS在工程化小鼠模型中探究肿瘤形成
RCASBP(A)载体已被广泛用于将癌基因、激活的信号蛋白或CRISPR/Cas载体导入至表达TVA的细胞中，以研究肿瘤的发生、进展以及肿瘤发生过程中的基因相互作用。此类模型对于深化我们对肿瘤生物学的理解以及在受控实验环境中评估潜在治疗策略具有重要价值。
试验验证
我们的 RCAS 病毒已通过全面验证，在禽类和哺乳动物宿主系统中均表现出很高的转导效率。
- 禽基因表达
- 哺乳动物基因表达
图4 使用RCAS载体制备表达EGFP的DF-1细胞。(A) 将编码EGFP的RCASBP(A)载体转染DF-1细胞。经扩增后，收集RCAS病毒颗粒，并用其转导天然DF-1细胞（感染复数MOI = 3）。感染后第4天，使用流式细胞术定量检测EGFP的荧光强度。(B) 感染后第4天的代表性荧光显微镜图像。曝光时间：明场= 10 ms；EGFP = 100 ms。放大倍数：100×。(C) 感染RCAS-EGFP的DF-1细胞显示其EGFP表达水平提高了约95%。
图5 使用RCAS载体制备表达EGFP的HEK293-TVA细胞。(A) 将编码EGFP的RCASBP(A)载体转染至DF-1细胞。经扩增后，收集RCAS病毒颗粒，并用其感染表达TVA的HEK293T细胞（感染复数MOI = 30）。感染后第3天，使用流式细胞术定量检测EGFP的荧光强度。(B) 代表性荧光显微镜图像。曝光时间：明场=10 ms；EGFP=100 ms。放大倍数：100×。(C) 感染RCAS-EGFP的HEK293T-TVA细胞显示其EGFP表达水平提高了约72%。
客户提供载体
如需客户提供RCASBP（A）质粒载体，请联系我们了解外来物品接收指南。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测，每一份材料附加检测费用。请注意，客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。
视频
暂无
文档
暂无
常见问题解答
RCAS通常指一类源自禽肉瘤白血病病毒的具有复制能力的逆转录病毒载体家族。VectorBuilder提供 RCASBP (A)载体基于Bryan聚合酶（BP）毒株构建，具有A亚群（针对TVA受体）包膜蛋白特异性。由于其细胞毒性低且病毒滴度高，该衍生载体被广泛使用。
由于VectorBuilder提供的重组RCAS载体含有禽类包膜蛋白且不会感染TVA蛋白阴性的哺乳动物细胞，该载体通常可在生物安全等级1级（BSL-1）设施中操作。然而，不同机构的生物安全政策可能存在显著差异。因此，研究人员有责任严格遵循其所在机构适用的生物安全指南来处理所有病毒载体。