我们可制备无核苷修饰或N1-甲基假尿苷（m1Ψ）修饰的hSpCas9 mRNA。我们的hSpCas9 IVT mRNA经过试验验证，在体外细胞中可以高水平表达hSpCas9。
订购信息
云舟生物可提供经过N1-甲基假尿苷（m1Ψ）修饰的和未修饰的hSpCas9 IVT mRNA，其基因编辑功能在体外细胞中经过了功能性验证。
ABE（腺嘌呤碱基编辑器）是衍生于CRISPR/Cas9和腺嘌呤脱氨酶系统的下一代基因编辑工具。我们在ABE7.10 mRNA基础上通过密码子优化得到的HiExpress™ ABE IVT mRNA专为体外高效表达而设计。
试验验证
图1 云舟生物开发的HiExpress™ hSpCas9 IVT mRNA具有很高的表达和编辑效率。使用1 ug hSpCas9 IVT mRNA和经过密码子优化的HiExpress™ hSpCas9 IVT mRNA分别转染HEK293T细胞。转染后24 h，对以上两组实验组与非处理对照（NC）进行（A）Western blot分析，并对（B）Cas9相对表达水平进行标准化定量。（C）使用1,000 ng gRNA与指示剂量的hSpCas9 IVT mRNA、HiExpress™ hSpCas9 IVT mRNA分别共转染HEK293T细胞。转染后24 h，T7E1酶切法检测基因编辑效率。蓝色星号所指为完整的PCR扩增子，粉色箭头指所指为T7E1酶切产生的片段。
图2 hSpCas9 IVT mRNA在体外的基因编辑效果。（A）向表达EGFP的HEK293T细胞转染打靶RGFP的gRNA以及经过N1-甲基假尿苷（m1Ψ）修饰的hSpCas9 IVT mRNA。（B）通过显微镜（100X）观察无转染的（NC）以及转染的两组细胞。（C）流式细胞术定量检测荧光强度。（D）转染后48或72 h，转染后的细胞相对NC减少了约40%的EGFP表达量。（E和F）基因编辑效果通过T7E1酶切（E）和Sanger测序确认（F）。高亮表示的腺嘌呤表明了在靶序列的插入突变。
图3 体外验证HiExpressTM ABE7.10 mRNA。编码原始版本ABE7.10和HiExpressTM ABE7.10的mRNA与相同的gRNA分别共转染HEK293T细胞。转染后48小时提取基因组DNA，PCR扩增目标区域并进行二代测序（NGS）。在编辑窗口（虚线框）内检测到A-to-G编辑（星号标记）。HiExpressTM ABE7.10 mRNA在第5位核苷酸实现了97.7%的编辑率，远超原始版本30.1%的表现。
服务商工作站 >>
