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如何在体内外实验中使用piggyBac载体系统?

PiggyBac系统包含两个载体,一个载体被称为辅助质粒,负责编码转座酶;另一个载体被称为转座子质粒,包含两个反向末端重复序列(ITRs)以及两者之间的被转座区域,需要被转座到宿主基因组中的目的基因(或其他片段)就克隆在这个区域。

当辅助质粒和转座子质粒共转染靶细胞时,辅助质粒产生的转座酶将会识别转座子的两个ITR元件,然后将被转座区和两个ITR元件插入到宿主基因组中。转座插入通常发生在包含TTAA序列的宿主染色体位点,并在转座子两侧出现TTAA重复序列。

在细胞培养体系中使用piggyBac载体系统相对简单,可以连续转染或共转染转座子和辅助质粒,也可以使用电转的方法代替化学转染。

然而,在活体动物中,化学转染和电转介导的质粒共转效率都较低。一些研究人员则分开制作表达转座子和转座酶的转基因动物,然后将两个转基因动物进行杂交;或是将单独的质粒转到表达转座子或转座酶的转基因动物中以诱导转座子发生转座(如Ding et al. Cell. 122:473-83Horn et el. Genetics. 163:647-61)。

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