重组蛋白毕赤酵母表达载体

概述

我们的毕赤酵母重组蛋白表达载体系统有着非常强大高效的重组蛋白表达能力。毕赤酵母作为一种甲基营养型酵母,被广泛应用在蛋白产品的研究和工业应用上。

在该载体系统中,目的基因通常被克隆在甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(GAP)和乙醇氧化酶1启动子(AOX1)的下游,这取决于基因的基本结构和表达诱导条件的要求。GAP是一个强大的组成型启动子,而AOX1则是受甲醇严格高效调控的启动子,这两个启动子都能够介导目的基因的高水平表达,目的蛋白的累加总量往往可达总细胞可溶性蛋白的30%以上。一般来说,GAP启动子的表达能力略强于诱导状态下的AOX1启动子。我们建议您做一个时间曲线测试,以确定表达目的蛋白的最佳启动子类型。

与酿酒酵母不同的是,毕赤酵母以甲醇为基础碳源,能更高水平地介导重组蛋白的表达(通常是酿酒酵母的的10-100倍)。另外,毕赤酵母和酿酒酵母在技术上有许多共通之处(如互补作用),通用的基因注释和遗传命名法简化了两个物种的研究。

关于该载体系统的更多信息,请参考以下文献。

参考文献 主题
Gene. 186:37 (1997) Description of GAP promoter
Mol Cell Biol. 5:1111 (1985)
Yeast. 5:167 (1989)
Description of AOX1 promoter
亮点

该载体系统用于在毕赤酵母中组成型或诱导型表达重组蛋白,目的基因被克隆在组成型启动子GAP或甲醇诱导型启动子AOX1的下游。

优势

高表达:GAP和AOX1都能介导目的基因的高水平表达。

严格控制表达:在无甲醇的情况下,AOX1启动子无法介导目的基因的表达;有甲醇的存在下,目的基因被强烈激活表达。

不足之处

潜在的泄漏表达:GAP是组成型启动子,表达水平不会受到调控;其次,虽然AOX1启动子在缺乏甲醇的条件下会被抑制,但少数情况下目的基因也会发生泄漏表达。

载体关键元件

Promoter: Drives high-level transcription of the gene of interest.

Kozak: Kozak consensus sequence. It is placed in front of the start codon of the ORF of interest because it is believed to facilitate translation initiation in eukaryotes.

ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.

AOX1 TT: The transcription terminator from P. pastoris alcohol oxidase 1. This facilitates transcriptional termination and polyadenylation of mRNA in yeast.

Zeocin: Zeocin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by Zeocin selection in E. coli and yeast.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.