学习中心
常见问题
VECTOR FAQ

为什么我的病毒滴度这么低?

根据我们的经验,如果客户从VectorBuilder购买病毒载体,但选择自己包装病毒,而不是使用我们的病毒包装服务,有50%以上的几率得到的病毒滴度明显低于最佳水平。这可能会导致彼此之间合作的不愉快。在许多情况下,选择自己做病毒包装的客户往往会指责我们的病毒载体包装效果差,滴度低,但当他们选择了我们的病毒包装服务后,才知道同样的载体VectorBuilder可以实现良好的滴度水平。

VectorBuilder研发出了一系列专利技术和试剂,大大改进了病毒包装的滴度、纯度、活性和均一性等。当客户自己包装病毒时,他们通常使用的是未经优化的操作规范,同时再加上缺乏经验,这些因素都会导致产出的病毒滴度很低。我们经常看到客户犯下低级错误,如使用错误的包装细胞或辅助质粒。一些客户错误地使用第二代慢病毒包装系统来包装我们的载体(VectorBuilder所有慢病毒载体都属于第三代病毒包装系统)。

T排除人员的技术能力因素,一些病毒载体由于各种原因本身难以被包装。最常见的原因之一是病毒载体携带对包装细胞有毒性的基因,使得包装细胞被杀死或状态非常差。针对这些情况,VectorBuilder已经开发了专利技术来克服毒性基因的影响,使其仍然可以包装出病毒。另一个常见的原因是插入片段对于该病毒包装系统来说太大了。我们建议您将慢病毒载体的插入片段大小限制为6.4 kb,腺病毒载体为7.5 kb,AAV载体为4.2 kb,MMLV载体为5.5 kb。如果插入片段超过上述限制,则会导致病毒包装效率下降。此外,根据我们的经验,如果病毒载体含有高GC序列(几百个碱基的GC含量>70%),则会降低其病毒包装效率。

随着时间的推移,包装好的高滴度病毒,其滴度也会降低,尤其是慢病毒。慢病毒非常不稳定,如果不在-80℃保存或者反复冻融可致其快速失去感染性。相比之下,腺病毒和腺相关病毒更稳定,但如果长时间未冻存或者处理不当,也可能会丧失感染活性。

有时候,VectorBuilder制备的病毒会给客户带来实际滴度远低于所标示滴度的错误印象,特别是客户使用那些更难转导的细胞转导病毒时。另外,客户通过表达荧光强度或者药物筛选标记来评估病毒滴度,可能会导致严重低估病毒滴度,因为荧光或药物筛选标记可能由于沉默或其他原因而无法在一些宿主细胞中检测到表达,或者是一个细胞可能感染了多个病毒颗粒。基于这些原因,在进行大量转导实验前,最重要的是先使用病毒对靶细胞进行不同感染复数(MOI)的小规模测试,以便得到转导该细胞的最佳MOI值。

我们提供慢病毒、MMLV逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒等病毒包装服务。请您选择我们的病毒包装服务,因为我们专有的包装试剂,包装细胞和方案对我们的病毒载体而言都是最优的。我们生产的病毒通常会比客户自己包装的具有更高的滴度、更高的纯度和更强的活性。我们的价格是具有高度竞争性的,可能低于您自己包装病毒的成本。

了解更多病毒包装服务信息