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常见问题

我是否可以将病毒载体直接转导细胞,还是需要先包装成病毒?

使用病毒载体直接转染细胞(而不是用活病毒)可以促进靶基因(GOI)的表达,但是会存在一些问题(见下文)。因此,我们建议将病毒载体包装成病毒使用,而不是直接转导细胞。

病毒转导通常可以比质粒转染能更有效地将DNA传递到靶细胞中。当使用逆转录病毒如慢病毒或MMLV时,病毒基因组可以整合到宿主细胞基因组,使得携带在病毒上的基因可以稳定表达。相反,转染的载体质粒DNA仅在细胞中瞬时表达。与低MOI病毒转导相比,质粒的直接转染通常会使细胞中DNA的拷贝数非常高,以致载体上携带的基因高水平表达。然而,这种方式是非常不均一的(一些细胞包含许多拷贝,而一些细胞只有很少或没有)。

我们的慢病毒载体5' LTR内含有强的RSV启动子,该启动子可用于在病毒包装过程中驱动病毒RNA基因组的转录。使用包装好的慢病毒转导细胞后,5' LTR的启动子活性失活,因此它不会影响两个LTR之间靶基因(GOI)的表达。然而,如果病毒载体直接转染细胞,5' LTR启动子将保持活性,这可能会导致许多不良效应,包括激活、扭曲或抑制慢病毒载体中下游基因的表达。

另外,由于病毒生产必需元件的存在,病毒载体大小通常大于包含相同表达盒的常规质粒。随着质粒大小的增加,DNA制备和质粒转染的效率都会下降。当直接进行质粒转染时,可能会导致转染效率变得非常低下,特别是大于30 kb的腺病毒载体。

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