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## 概述
PB转座子诱导型基因表达载体结合了载体家高效的PB转座子载体系统和Tet-
On基因诱导表达系统，帮助您在宿主基因组上永久整合可使用四环素诱导表达的GOI表达盒。
Tet-On基因诱导表达载体系统是在哺乳动物细胞中进行实时GOI表达的强大工具。我们的Tet-
On基因诱导表达载体系统在无四环素及其类似物（多西环素）的情况下可以做到GOI几近完全沉默并且在加入四环素及其类似物（多西环素）的情况下快速响应实现GOI表达。这是通过tTS和rtTA蛋白响应四环素及其类似物（多西环素）的基因调控功能实现的。当不存在四环素及其类似物（多西环素）的情况下，目的基因几乎或完全沉默；当往体系中添加四环素或其他类似物（多西环素）时，目的基因得到快速高水平表达。四环素不存在的情况下时，衍生于TeR（Tet抑制蛋白）和KRAB-
AB（Kid-1蛋白转录抑制结构域）的融合蛋白tTS结合TRE启动子，导致基因转录抑制。另一方面，四环素存在时，衍生于突变型Ter抑制蛋白和VP16蛋白（转录激活结构域）的融合蛋白rtTA结合TRE启动子，激活基因转录。...
## 概述
CRISPR/Cas9（成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9）系统极大地促进了多种物种的体外和体内基因抑制实验。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22
nt的同源靶序列直接相互作用提供靶向特异性。gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。Cas9扫描基因组并切割与gRNA互补的序列，前提是这些序列跟随着一段NGG前间区序列邻近基序（PAM）。双链DNA断裂随后被HDR或者NHEJ途径修复，从而产生不同大小长度的位点突变（碱基插入或缺失）。
使用一个一体化的同时表达Cas9和gRNA的载体，或者分开表达Cas9和gRNA的载体，可以方便地在线虫中进行CRISPR/Cas9编辑。该载体系统属于后者，包含一个线虫密码子优化的Cas9基因。该基因位于一个可加强表达的人工启动子下游，并以一个包含polyA加尾信号序列的3'
UTR结尾。...
## 概述
MSCV（Murine stem cell
virus，鼠干细胞病毒）逆转录病毒载体系统是一种非常高效的、能在胚胎干细胞（ES）、胚胎癌细胞（EC）、造血干细胞（HS）及其他哺乳动物细胞系中大量表达目的基因的病毒工具。
MSCV逆转录病毒载体衍生于MESV和LN两种逆转录病毒载体，这两种载体分别是基于鼠PCC4细胞骨髓增生性肉瘤病毒
（PCMV）和莫洛尼鼠白血病病毒（MMLV）。MSCV包含一个延伸的杂合包装信号，该信号源于LN载体，同传统的逆转录病毒载体相比，病毒滴度更高。此外，MSCV逆转录病毒载体包含PCMV病毒来源的经过设计的5'LTR，有助于靶基因在ES细胞、EC细胞等多能细胞系中的转录激活，克服了目的基因在此两种细胞中抑制性表达的现象，而该现象通常能在MMLV逆转录病毒载体中观察到。
MSCV逆转录病毒载体首先构建成大肠杆菌质粒。随后同辅助质粒一起被转染到包装细胞中。在包装细胞内，位于两个长末端重复序列（LTRs）之间的载体DNA转录成RNA，辅助质粒表达病毒蛋白将RNA包装成病毒。之后，活病毒分泌到上清中，可用于直接或者浓缩后感染靶细胞。...
## 概述
CRISPR/Cas9载体属于几种新兴的基因组编辑工具之一，可以快速有效地在基因组的靶位点产生突变（另外两种应用广泛的是ZFN和TALEN）。这些质粒载体编码序列特异性RNA介导的DNA核酸酶（或切口酶），可用于编辑基因组中特定位点的DNA序列。
Cas9属于RNA引导的DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抗性。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22
nt的同源靶序列直接相互作用提供靶向特异性。gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。
常规质粒gRNA特异性检测载体设计用于测试CRISPR/Cas9对一个或多个gRNA靶序列的切割效率。该系统允许用户通过比对多个gRNA靶位点来筛选出最有效的CRISPR/Cas9靶点。
常规质粒gRNA特异性检测载体系统的基础是位于强启动子EF1A下游的无活性且分隔开的EGFP
ORF。将待测试的gRNA靶位点克隆在两个不完整的无功能性的EGFP ORF（称为EGFP-L和EGFP-R）之间。...
#### 概述
慢病毒载体系统是一种能非常高效的把外源基因稳定整合到哺乳动物细胞中的载体工具。除了常规质粒转染外，目前该系统也是把外源基因转入哺乳动物细胞的最常用方法之一。由于具有目的基因和启动子选择的灵活性以及转染细胞类型的广泛性两大特点，使得慢病毒载体系统成为倍受欢迎的外源基因表达系统。
慢病毒载体来源于人类免疫缺陷病毒HIV，属于逆转录病毒家族。野生型慢病毒基因组是线性双正链RNA。
慢病毒重组载体构建完成后与辅助质粒一起转染进入包装细胞。在包装细胞中，位于两个长末端重复序列（LTR）之间的DNA片段会被转录成RNA，由辅助质粒表达的病毒蛋白将其包装形成病毒颗粒。包装后的活体病毒将会被释放到上清液中，可以直接收集或进一步浓缩病毒转染靶细胞。
当病毒转导靶细胞时，释放到宿主细胞中的病毒RNA借助逆转录酶逆转录成双链DNA，然后随机整合进宿主细胞的基因组中。在病毒载体中，位于两个LTR的DNA片段和病毒基因组都会稳定整合到靶细胞的基因组中。...
## 概述
慢病毒载体系统是一种能非常高效的把外源基因稳定整合到哺乳动物细胞中的载体工具。除了常规质粒转染外，目前该系统也是把外源基因转入哺乳动物细胞的最常用方法之一。由于具有目的基因和启动子选择的灵活性以及转染细胞类型的广泛性两大特点，使得慢病毒载体系统成为倍受欢迎的外源基因表达系统。
慢病毒载体来源于人类免疫缺陷病毒HIV，属于逆转录病毒家族。野生型慢病毒基因组是线性双正链RNA。
慢病毒重组载体构建完成后与辅助质粒一起转染进入包装细胞。在包装细胞中，位于两个长末端重复序列（LTR）之间的DNA片段会被转录成RNA，由辅助质粒表达的病毒蛋白将其包装形成病毒颗粒。包装后的活体病毒将会被释放到上清液中，可以直接收集或进一步浓缩病毒转染靶细胞。
当病毒转导靶细胞时，释放到宿主细胞中的病毒RNA借助逆转录酶逆转录成双链DNA，然后随机整合进宿主细胞的基因组中。在病毒载体中，位于两个LTR的DNA片段和病毒基因组都会稳定整合到靶细胞的基因组中。...
## 概述
无肠腺病毒载体（又称辅助依赖性腺病毒载体）是比前几代腺病毒载体显著改进安全性的新一代腺病毒载体。这种载体上除了病毒复制和包装所必需的顺式作用元件外，几乎不含任何病毒序列，使得无肠腺病毒载体在体内使用时表现出极低的免疫原性和长期的转基因表达，在应用于基因治疗方面具有高度的有吸引力。此外，由于删除了病毒编码序列，该种载体的装载容量可增加至37
kb，使其可以表达大尺寸或多个的转基因。
由于无肠腺病毒载体缺乏所有病毒编码序列，成功包装重组病毒所需的病毒蛋白通过包装时的辅助病毒提供。对于无肠腺病毒载体，包含用户目的基因（GOI）的表达盒由启动子驱动，并且被克隆到两个ITR（反向重复序列）之间。此外，该载体还加入了适当长度的填充序列，以保持两个ITR之间的序列最终大小超过28
kb，这对于促进病毒颗粒的高效包装是必要的。包装时，载体上的两个ITR之前的区域通过限制性内切酶消化从质粒中释放出来。释放的片段被转染到包装细胞中，这些细胞随后通过转导辅助病毒以产生重组腺病毒颗粒。...
## 概述
MMLV逆转录病毒基因表达载体系统是一种非常高效的，能把外源基因稳定整合到哺乳动物细胞基因组的系统，也是在iPS细胞制备中特别受欢迎的基因转导方法。
MMLV逆转录病毒载体来源于莫洛尼（氏）鼠白血病病毒，属于逆转录病毒家族，野生型逆转录病毒基因组是线性双正链RNA。
MMLV逆转录病毒重组载体构建完成后与辅助质粒一起转染进入包装细胞。在包装细胞中，位于两个长末端重复序列（LTRs）之间的DNA片段会被转录成RNA，由辅助质粒表达的病毒蛋白将其包装形成病毒颗粒。包装后的活体病毒将会被释放到上清液中，可以直接收集或进一步浓缩病毒转染靶细胞。
当病毒转导靶细胞时，释放到宿主细胞中的病毒RNA借助逆转录酶逆转录成DNA，然后随机整合进宿主细胞的基因组中。在病毒载体中，位于两个LTR的DNA片段和病毒基因组都会稳定整合到靶细胞的基因组中。
通过改造优化，我们的MMLV逆转录病毒载体删除了与病毒包装和转导相关的基因（这些基因由辅助质粒进行表达，用于病毒包装过程）。因此，通过逆转录病毒载体包装产生的病毒是复制缺陷型的（只能转导靶细胞而不能自我复制），具有非常高的生物安全性。...
## 概述
我们的pUAST载体系统是一个良好、高效的转基因果蝇制备和基因表达控制系统。该系统来源于常用的果蝇P元件转座子，结合强诱导型启动子Gal4以调节转基因表达。
完整的pUAST系统包含两个载体，一个载体被称为pUAST质粒，包含两个P元件末端重复，包括待转座的区域或基因；另一个载体称为辅助质粒或转座酶质粒，编码P转座酶。
当pUAST与转座酶质粒共转染靶细胞时，辅助质粒产生的转座酶识别pUAST质粒上的两个P元件末端重复序列，然后将待转座区和两个P元件末端重复序列插入到宿主基因组中。
P元件属于II类转座子，通过"剪切--粘贴"的机制移动，从一个地方转座到另一个地方，而不留下序列本身（恰好相反，I类转座子是通过"复制--
粘贴"的方式移动），在每一个插入位点都会产生一个8 bp的正向重复序列。
通过将pUAST和辅助质粒共注射到果蝇早期胚胎中可以产生转基因果蝇。P转座酶介导两个P元件末端重复序列之间的重组导致生殖系重组交换，以致产生携带靶基因的转基因后代。P转座酶仅在短时间内表达，并且随着辅助质粒的丢失，转座子在宿主基因组中的整合便成为永久性的。...
## 概述
CRISPR/Cas9（成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9）系统极大地促进了多种物种的体外和体内基因抑制实验。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA（gRNA）形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22
nt的同源靶序列直接相互作用提供靶向特异性。gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。Cas9扫描基因组并切割与gRNA互补的序列，前提是这些序列跟随着一段NGG前间区序列邻近基序（PAM）。双链DNA断裂随后被HDR或者NHEJ途径修复，从而产生不同大小长度的位点突变（碱基插入或缺失）。
使用一个一体化的同时表达Cas9和gRNA的载体，或者分开表达Cas9和gRNA的载体，可以方便地在线虫中进行CRISPR/Cas9编辑。该载体系统属于后者，包含一个线虫密码子优化的U6启动子驱动表达的gRNA。该载体可以被注射到线虫的远端性腺，然后进入生殖细胞细胞核。使用该载体注射的线虫可以表达Cas9。筛选突变后代，获得突变可遗传的基因敲除线虫品系。
关于该载体系统的更新信息，请参考以下文献。...
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