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常见问题

我应该使用荧光蛋白,荧光素酶还是LacZ?

荧光蛋白,萤光素酶和LacZ都是基于重组蛋白的报告基因,可以用于定位或成像研究。然而,这几类蛋白各有不同,适用于不同的实验设计。

荧光蛋白和萤光素酶都属于发光蛋白,可用照相机或类似的装置来检测荧光表达。荧光蛋白通过吸收一种颜色的光(激发),然后发出不同颜色(发射)的较低能量光来起作用。相反,萤光素酶(和其他生物发光酶)通过催化底物(即萤光素)发生化学反应而发光。

荧光蛋白比萤光素酶明亮得多,这有利于将其应用到许多不同类型的实验中。但是,在组织样品或活体动物中,背景、自发荧光和光散射等问题可能会影响荧光的观察。荧光素酶的活性分析需要萤光素,所以在分析之前必须将该底物加入培养基或注射到活体动物体内。与荧光蛋白相比,这可能会影响实验的重复性或定量。

与上述两种标记不同,LacZ不发光。相反,LacZ基因的产物β-半乳糖苷酶可以催化X-gal转化成类似于靛蓝的不透明蓝色化合物。为了使LacZ可视化,首先必须将样品用X-gal溶液染色,且该染色步骤与活体样品观察不兼容。尽管高度敏感,但LacZ/X-gal染色是非定量的,并且不能提供类似荧光或生物发光蛋白的高分辨率。

通常情况下,我们建议LacZ用于整体胚胎或组织切片的基因表达研究。对于活体动物研究来说,荧光或生物发光可能是更好的选择,但也跟多种因素有关,如是否需要对内部深层组织进行成像以及是否存在标记亮度问题。