shRNA(IPTG诱导表达)慢病毒套装

IPTG诱导型RNA干扰(IPTG-inducible RNA interference )是相较shRNA过表达和Tet诱导型RNAi的新型基因敲低技术。以普通慢病毒形式将shRNA引入哺乳动物细胞,shRNA序列整合宿主基因组并持续表达,适用于感染分裂和非分裂细胞。而转导IPTG诱导型shRNA慢病毒后,需要添加IPTG进行诱导才能让shRNA表达。不同于普通shRNA慢病毒在细胞中造成的长期RNA干扰效果,使用诱导型shRNA慢病毒转导,在敲低与细胞生存密切关联的关键基因(Essential gene)或者致死基因(Lethal gene)时可更灵活调控RNAi造成的细胞生存压力,提升实验的可操作性。对比Tet诱导系统可能造成的shRNA泄露表达,我们的IPTG诱导系统对shRNA病毒载体序列进行了专门优化,无诱导物时的泄露表达极低,兼顾shRNA过表达的高效敲低和Tet诱导系统可调控shRNA表达的优点,可完成高质量的诱导型RNAi实验。

订购信息

注意:以上价格不包含载体构建费用

产品描述

病毒包装方式

第三代慢病毒(默认),第二代慢病毒

包膜蛋白

VSV-G(默认)、其他自定义

浓缩、纯化技术

PEG浓缩、蔗糖离心纯化等

运输条件

干冰

存储温度

-80℃,避免反复冻融

质量控制
  • 滴度测定
  • 微生物(细菌和真菌)检测
  • 支原体检测
  • 荧光表达情况检测
  • 内毒素水平检测
常见问题解答

shRNA(IPTG诱导表达)慢病毒载体是基于乳糖操纵子(Lac operon)的表达调控系统。该种shRNA慢病毒载体转导细胞后,位于两个LTR之间的载体区域被整合到细胞基因组上,这其中包含了所有Lac operon序列、Lac I基因和shRNA序列。Lac I基因以组成型方式表达Lac operon的转录阻碍物(Lac repressor)。Lac repressor与乳糖操纵子区域在结合进一步形成转录阻碍物复合体。Lac repressor是同源四聚体结构,含有2个DNA结合亚基,可同时结合多个lac operon。在IPTG诱导型shRNA慢病毒载体中,shRNA序列的上游U6启动子和转录终止信号下游均设计有lac operon序列。lac阻碍物因此可通过多种方式结合这些区域并在U6启动子下游转录区域形成DNA套环结构,从而阻止RNA 聚合酶的行进。

异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)是一种乳糖类似物,进入细胞后随即结合lac repressor并改变其构象。此时lac repressor从DNA链上释放,转录正常进行。由于细胞不会代谢IPTG,其浓度在实验中不改变,因此可作为该载体系统表达shRNA的诱导物。

shRNA(IPTG诱导表达)慢病毒转导哺乳动物细胞遵循常规的慢病毒转导方式。以293T细胞为例:

1. 慢病毒转导后,可进行药筛富集转导成功的细胞。

2. 将细胞分为实验组和对照组。往实验组中添加IPTG,终浓度1 mM。阴性对照组不添加IPTG。

3. 继续传代培养细胞8-10天,期间正常进行细胞换液。每次换液保持实验组添加有IPTG。

4. 往后即可观察或检测实验组相应的RNAi效果。

文档

使用说明书

慢病毒体外应用
慢病毒体内应用