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CRISPRi慢病毒套装
除了基因组编辑之外，Cas9还可以充当基因表达的可编程阻遏物。仅两点突变即可产生没有剪切活性的Cas9（dead Cas9，简称dCas9）。在这个CRISPRi系统中，dCas9与KRAB和MeCP2阻遏域融合在一起，以进行强大的基因阻遏。与shRNA相比，CRISPRi可以沉默更多类型基因，如蛋白编码基因、非编码RNA、microRNA等。CRISPRi慢病毒套装包含2种病毒：gRNA慢病毒和dCas9-KRAB-MeCP2慢病毒。gRNA慢病毒携带Puromycin抗性基因，而dCas9-KRAB-MeCP2慢病毒携带Hygromycin抗性基因。进行实验时，使用Puromycin和Hygromycin两种抗生素筛选转导细胞。
订购信息
注意：以上价格不包含载体构建费用
产品描述
病毒包装方式
第三代慢病毒（默认），第二代慢病毒
包膜蛋白
VSV-G（默认）、其他自定义
浓缩、纯化技术
PEG浓缩、蔗糖离心纯化等
运输条件
干冰
存储温度
-80℃，避免反复冻融
质量控制
- 滴度测定
- 微生物（细菌和真菌）检测
- 支原体检测
- 荧光表达情况检测
- 内毒素水平检测
常见问题解答
| shRNA | CRISPRi | |
| 工作原理 | 基因敲除能通过short hairpin RNAs（shRNAs）实现。shRNA表达后，被加⼯成small interfering RNAs（siRNAs）。这些siRNA被运到RNA-induced silencing complex（RISC）那里。接着，siRNA的反向链与正向链解开，正向链被降解、丢弃，反向链继续与RISC复合物结合，将有活性的RISC复合物引导⾄与反向链互补的mRNA。⼀旦反向链与mRNA完全互补结合，RISC复合物中的⼀个蛋白，argonaute，会剪切mRNA，从而抑制mRNA编码的蛋⽩翻译表达。 | CRISPR interference（CRISPRi）技术采⽤了⼀个nuclease-dead Cas9蛋白（dCas9）与转录抑制因⼦组成的融合蛋白，例如Kruppel-associated box（KRAB）转录抑制因子。在这个融合蛋白里，dCas9仍然保留与DNA结合的活性，但是失去了核酸酶活性。dCas9融合蛋⽩在⼀条guide RNA（gRNA）引导下，结合至目标基因的transcriptional start site（TSS）区域，从而阻遏该基因的转录。 |
| 目标分子 | 成熟mRNA | 基因的TSS区域 |
| 打靶事件发⽣位置 | 细胞质 | 细胞核 |
| 抑制基因种类 | mRNA编码基因、胞质lncRNA | mRNA编码基因（针对因转录本太短而不能设计出有效shRNA的基因，可选择CRISPRi技术）、胞质lncRNA、核内lncRNA |
| 脱靶⻛险 |
RNAi存在2类脱靶：序列相关性和非序列相关性 序列相关性脱靶： 仅凭有限的部分碱基互补，siRNA就能引起非目标mRNA的沉默。 取决于siRNA序列，⼀个siRNA可能抑制成百上千条转录本。 非序列相关性脱靶： shRNA采⽤内源miRNA通路实现基因敲除。当⼤量shRNA导⼊细胞后，它们使RNAi系统达到饱和，并与内源miRNA竞争蛋白，例如Dicer、RISC和其它因子。由此，那些内源miRNA介导的基因调控受到干扰，导致不可以预期的脱靶。 |
与shRNA相比，CRISPRi的脱靶机率超低。 |
| 可逆的基因抑制 | 如使⽤质粒载体或者合成的siRNA，基因沉默是可逆的。如使⽤整合型病毒载体（如：慢病毒载体）实现结构性表达shRNA，则沉默非可逆性。 | 如使⽤质粒载体或者合成的dCas9融合蛋白/gRNA，基因沉默是可逆的。如使⽤整合型病毒载体（如：慢病毒载体）实现结构性表达dCas9融合蛋白和gRNA，则沉默非可逆性。如沉默重要的基因，推荐使⽤TetOn诱导表达CRISPRi慢病毒载体，可通过药物控制这些基因的沉默。 |
我们使用的gRNA设计和评分规则与张峰实验室开发的运算规则类似。简而言之，对于每个物种，我们找出符合N(20)NGG规则的靶序列，把错配碱基 ≤3的序列列为潜在的脱靶位点，计算出每个gRNA的脱靶分值，进而得出最终的gRNA特异性分值。gRNA特异性分值在0-100之间，分值越大靶向特异性越高。
请注意特异性分值只是一个参考值。实际的靶向效率和特异性可能会与预测的分值有偏差，低分值的gRNA也可能有较好的靶向效果。
文档
使用说明书
转染用慢病毒载体慢病毒体外应用
慢病毒体内应用