scAAV病毒包装

常用的重组AAV载体包含的病毒基因组是单链DNA(Single stranded DNA,简称ssDNA),所以也被称为ssAAV。单链DNA在转录上没有活性,因此ssAAV载体的转基因表达取决于第二条链合成的效率。自身互补AAV(Self-complementary AAV,简称scAAV)是一种源自AAV的新技术,其编码区被改造成能形成分子内双链DNA模板。感染后,scAAV的两个互补半部分将结合在一起,形成一个可立即复制和转录的双链DNA(dsDNA)单元。

订购信息
病毒类型

我们提供的scAAV(self-complementary AAV)的包装服务涵盖以下血清型:

血清型 组织嗜性
AAV1 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜, 内耳组织, 胰腺, 心脏, 肝
AAV2 平滑肌, 中枢神经系统, 肝, 肾, 视网膜, 内耳组织
AAV3 平滑肌, 肝, 肺
AAV4 中枢神经系统, 视网膜, 肺, 肾
AAV5 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜
AAV6 平滑肌, 心脏, 肺, 脂肪组织, 肝
AAV6.2 肺, 肝, 内耳组织
AAV7 平滑肌, 视网膜, 中枢神经系统, 肝
AAV8 平滑肌, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 肝, 胰腺, 心脏, 肾, 脂肪组织
AAV9 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 睾丸, 肾
AAVrh10 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 肾
AAV-DJ 肝, 心脏, 肾, 脾
AAV-DJ/8 肝, 脑, 脾
AAV-PHP.eB 中枢神经系统
AAV-PHP.S 外周神经系统
AAV2-retro 脊神经
AAV2-QuadYF 上皮细胞
AAV2.7m8 视网膜, 内耳组织
组织 推荐使用的AAV血清型
平滑肌 AAV1, AAV2, AAV3, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10
中枢神经系统 AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-PHP.eB
外周神经系统 AAV-PHP.S
AAV1, AAV2, AAV5, AAV7, AAV8, AAV-DJ/8
视网膜 AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV2.7m8
内耳组织 AAV1, AAV2, AAV6.2, AAV8, AAV9, AAV2.7m8
AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV6.2, AAV9, AAVrh10
AAV1, AAV2, AAV3, AAV6, AAV6.2, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8
胰腺 AAV1, AAV2, AAV6, AAV8, AAV9, AAVrh10
心脏 AAV1, AAV4, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ
AAV2, AAV4, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8
脂肪组织 AAV6, AAV8, AAV9
睾丸 AAV2, AAV9
AAV-DJ, AAV-DJ/8
脊神经 AAV2-retro
上皮细胞 AAV2-QuadYF

注意:携带目的基因的转移质粒上的ITR序列来自于AAV2。一般来说,包装不同血清型的AAV,指的是使用不同血清型的衣壳蛋白表达质粒,与携带AAV2 ITR的转移质粒进行包装。

查看不同腺相关病毒血清型病毒衣壳蛋白1(VP1)的氨基酸序列 >>

交付内容
非纯化scAAV制备服务 纯化scAAV制备服务
交付内容

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>1011GC/ml,10 x 25 ul
  • 中量制备:>1011GC/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1012GC/ml,10 x 100 ul

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4 x 25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10 x 50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送:

  • ⼩量制备:>1011GC/ml,100 ul
  • 中量制备:>1011GC/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1012GC/ml,10 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4 x 25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10 x 50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10 x 100 ul
Polybrene(5 mg/ml,200 ul),赠送 Polybrene(5 mg/ml,200 ul),赠送

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1011GC/ml,10 x 25 ul
  • 中量制备:>1011GC/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1012GC/ml,10 x 100 ul

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1013GC/ml,4 x 25 ul
  • 中量制备:>1013GC/ml,10 x 50 ul
  • ⼤量制备:>1013GC/ml,10 x 100 ul
病毒重悬液 PBS缓冲液 PBS缓冲液
运输/存储 干冰/-80°C,避免反复冻融 干冰/-80°C,避免反复冻融
推荐应用 体外培养细胞转导 体外培养细胞转导、动物体内细胞转导

对照病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:

辅助病毒 对照载体名称 对照载体ID 定制病毒
EGFP对照AAV病毒 pAAV[Exp]-CMV>EGFP:WPRE VB190926-1395dab 哺乳动物基因表达AAV病毒(包含Tet-On诱导表达和FLEX条件性表达)、哺乳动物AAV CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达AAV病毒
mCherry对照AAV病毒 pAAV[Exp]-CMV>mCherry VB151126-10021
Scramble shRNA对照AAV病毒,EGFP荧光 pAAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA VB180117-1020znr 哺乳动物shRNA干扰AAV病毒
Scramble shRNA对照AAV病毒,mCherry荧光 pAAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA VB171129-1300zqh
Scramble miR30-shRNA对照AAV病毒,EGFP荧光 pAAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE VB190813-1134mnj 哺乳动物miR30-shRNA干扰AAV病毒
Tet-On EGFP 对照AAV病毒(选购) pAAV[Tet_on]-TRE>EGFP-CBh>tTS:T2A:rtTA VB180124-1047fqv 哺乳动物基因Tet-On诱导表达AAV病毒
FLEX-EGFP对照AAV病毒(选购) pAAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) VB180820-1044gcq 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒

辅助病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如,如果定制病毒是一个只含TRE启动子的TetOn慢病毒,则需要一个表达rtTA的辅助病毒,才能进行诱导表达实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示:

辅助病毒 对照载体名称 对照载体ID 定制病毒
SaCas9 AAV病毒(选购) pAAV[Exp]-CMV>saCas9 VB180125-1089ffa 哺乳动物gRNA AAV病毒(不含Cas9)
Cre AAV病毒(选购) pAAV[Exp]-CMV>Cre VB171024-1202yau 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒
运输/储存

我们的AAV病毒存储在PBS缓冲液中,并采用干冰运输。收到AAV病毒后,立即放置于-80℃,可保存约一年。若放置于-20℃,则可保存2-3周。融解后的AAV病毒可在4℃保存1-2周。虽然AAV病毒比其他多数病毒稳定(如慢病毒),但是也请避免反复冻融,因为这会导致AAV病毒滴度显著下降。

生产/质控
步骤 描述 时间

Triple-transfection

我们常规使用的helper-free腺相关病毒包装系统包括1个转移质粒(Transfer plasmid)、1个Rep和Cap表达质粒(Rep-Cap plasmid)和1个辅助质粒(Helper plasmid),其包装过程是将携带目的基因(Gene of Interest, 简称GOI)和ITR序列的转移质粒、表达特定血清型衣壳蛋白的Rep-Cap质粒和编码介导腺相关病毒复制的腺病毒基因(E2、E2A和VA)的辅助质粒共转染HEK293T包装细胞,这个转染过程称为三质粒转染(Triple-transfection)。 第1天

Supernatant collection

在细胞里,转导质粒表达包含目的基因(Gene of Interest, GOI)的AAV基因组,Rep-Cap质粒表达特定血清型的AAV衣壳蛋白,辅助质粒表达辅助AAV基因组表达翻译的组分。三者共同作用从而在细胞中生成完整的AAV病毒颗粒。细胞短暂孵育后,根据血清型的不同,收集上清或者细胞裂解液获取病毒颗粒 第3天

Concentration and purification

PEG浓缩病毒颗粒。对于超纯化腺相关病毒(体内应用级别),再通过氯化铯(CsCl)密度梯度离心对病毒颗粒进一步纯化和浓缩。 第5天

Quality Control

对病毒采用ITR qPCR方法进行滴度测定(Titer determination)、并且还进行微生物检测(Bioburden test,针对细菌、真菌)、支原体检测(Mycoplasma test)等。

若转移载体同时编码一个荧光蛋白,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况(Transduction test)。此外,对于超纯化AAV病毒,我们还可以检测内毒素水平(Endotoxin test)和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度(Virus purity test)。

第7天及以后
滴度保证

scAAV载体的装载能力只有ssAAV的一半。我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ ITR到3’ ITR)小于scAAV承载限度(1.7 kb)的载体。超过该范围将导致包装出来的AAV病毒颗粒含有不完整的genome,不仅影响ITR qPCR滴度检测,而且影响转基因表达。此外,对于如下情况,我们同样不能保证滴度:

  • 使用血清型4、6和DJ/8的AAV,其滴度是其他血清型的30%-50%。
  • 包含对包装过程有不利影响的序列,例如毒性基因(如促凋亡基因);破坏包装细胞或病毒的完整性(如导致细胞聚集的膜蛋白)的基因 ;易于重排或者产生二级结构的序列(如重复序列或者高GC含量序列)。
  • ⽤户提供的载体,因为我们无法控制载体质量。
客户提供载体

如需客户提供慢病毒载体,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

视频

暂无

文档

使用说明书

腺相关病毒体外应用

腺相关病毒体内应用

COA

您可以在我们的产品标签或包装上找到产品批号。

常见问题解答
慢病毒 MMLV 腺病毒 AAV
组织嗜性 广泛 广泛 hAd5只感染表达CAR受体的细胞 取决于血清型
是否可感染非分裂细胞
病毒基因组稳定整合抑或游离于宿主基因组 稳定整合 稳定整合 游离的DNA附加体形式 游离的DNA附加体形式
滴度 中等 非常高
自定义启动子
应用 细胞培养和体内实验 细胞培养和体内实验 体内实验 体内实验
体内免疫反应 非常低

我们通过裂解AAV病毒颗粒,然后以qPCR测定裂解产物中的AAV基因组拷贝数(ITR区域的拷贝数)来获取AAV的物理滴度(Physical titer)。其他滴度测定方式如ddPCR、TCID50以选购方式提供。