腺病毒包装

腺病毒载体(Adenovirus)能够携带大片段外源DNA、感染分裂细胞和非分裂细胞、诱导体液和细胞免疫应答(这对于疫苗开发是有益的)、表现出高效率的转导和高水平的转基因表达、不整合细胞DNA(在细胞内保持dsDNA游离体)。这些特性使腺病毒作为用于基因治疗的转基因载体、疫苗载体和溶瘤病毒疗法中使用的载体。我们开发出一系列专有技术和试剂,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺病毒包装工艺水平。

订购信息
服务类型

我们提供第一代腺病毒(E1/E3-deleted Ad5)和嵌合型腺病毒(Chimeric adenovirus)包装服务。Ad5病毒的感染是通过病毒颗粒表面的纤突(Fiber)与细胞表面受体CAR(Coxsackie virus and adenovirus receptor)特异性结合而介导的。 并不是所有细胞都高表达CAR,Ad5病毒在某些不表达或者低表达CAR的细胞种类上的应用受限。我们开发了嵌合型腺病毒,它的感染是通过嵌合型纤突(Chimeric fiber)与细胞表面分子CD46特异性结合而介导的。

交付内容
非纯化腺病毒制备服务 纯化腺病毒制备服务
交付内容

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>1010PFU/ml,10 x 25 ul
  • 中量制备:>1010PFU/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1011PFU/ml,10 x 100 ul

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼤量制备:>1012VP/ml,10 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送:

  • ⼩量制备:>1010PFU/ml,100 ul
  • 中量制备:>1010PFU/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1010PFU/ml,10 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼤量制备:>1012VP/ml,10 x 100 ul
Polybrene(5 mg/ml,200 ul),赠送 Polybrene(5 mg/ml,200 ul),赠送

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1010PFU/ml,10 x 25 ul
  • 中量制备:>1010PFU/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1011PFU/ml,10 x 100 ul

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼤量制备:>1012VP/ml,10 x 100 ul
病毒重悬液 HBSS缓冲液 GTS缓冲液
运输/存储 干冰/-80°C,避免反复冻融 干冰/-80°C,避免反复冻融
推荐应用 体外培养细胞转导 动物体内细胞转导

对照病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:

辅助病毒 对照载体名称 对照载体ID 定制病毒
EGFP对照腺病毒 pAV[Exp]-CMV>EGFP VB150925-10024 哺乳动物基因表达腺病毒(包含FLEX条件性表达)、哺乳动物腺病毒CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达腺病毒
mCherry对照腺病毒 pAV[Exp]-CMV>mCherry VB150211-10012
Scramble shRNA对照腺病毒,EGFP荧光 pAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA VB161026-1127kyf 哺乳动物shRNA干扰腺病毒
Scramble shRNA对照腺病毒,mCherry荧光 pAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA VB170622-1067wvd
Scramble miR30-shRNA对照腺病毒,EGFP荧光 pAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE VB180124-1101mjs 哺乳动物miR30-shRNA干扰腺病毒
FLEX-EGFP对照腺病毒(选购) pAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) VB180820-1023rwq 哺乳动物基因FLEX条件性表达腺病毒

辅助病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如,如果定制化的病毒是一个gRNA腺病毒(只表达gRNA),则需要一个表达Cas9的辅助病毒,才能进行CRISPR编辑实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示:

辅助病毒 对照载体名称 对照载体ID 定制病毒
Cas9 腺病毒(选购) pAV[Exp]-CMV>hCas9 VB180820-1032mbq 哺乳动物gRNA 腺病毒(不含Cas9)
Cre腺病毒(选购) pAV[Exp]-CMV>Cre VB180308-1398jmt 哺乳动物基因FLEX条件性表达腺病毒
运输/储存

我们的非纯化腺病毒存储于HBSS缓冲液,纯化腺病毒存储于GTS缓冲液中,并采用干冰运输。收到腺病毒后,立即放置于-80℃,可保存约一年。若放置于-20℃,则可保存2-3周。融解后的腺病毒可在4℃保存1-2周。虽然腺病毒比其他多数病毒稳定(如慢病毒),但是也请避免反复冻融,因为这会导致腺病毒滴度显著下降。

生产/质控
步骤 描述 时间

Plasmid linearization and Transfection

我们常规使用的第一代腺病毒包装系统包括1个含有缺失了E1/E3基因的腺病毒基因组序列的转移质粒(Transfer plasmid)和1个表达E1基因的包装细胞(adenoviral E1-expressing cell line),其包装流程是通过内切酶PacI将携带目的基因(Gene of Interest,简称GOI)的转移质粒线性化。线性化的质粒DNA随后转染到包装细胞中,E1基因的表达产物激活转移质粒上的腺病毒基因的表达(E3基因的缺失不影响腺病毒的包装),产生重组腺病毒颗粒。此时生产出来的为粗制的腺病毒。 第1-6天

Virus amplification

粗制的腺病毒再次转导到在包装细胞中进行扩增。 第7天

Concentration and purification

对于非纯化的腺病毒,腺病毒可以被细胞直接分泌到培养基中,然后进行收集。对于超纯化腺病毒,则还需要进一步的氯化铯(CsCl)密度梯度离心进一步纯化和浓缩。 第24天

Quality Control

对于每一个我们生产的腺病毒,质量控制均包括基于免疫组化(IHC)的滴度测定(Titer determination)、微生物(细菌和真菌)检测(Bioburden test)和支原体检测(Mycoplasma test)。

若转移载体同时编码一个荧光蛋白,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况(Transduction test)。此外,对于超纯化腺病毒,我们还可以检测内毒素水平(Endotoxin test)。

第28天及以后
滴度保证

我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ ITR 到3’ ITR)小于腺病毒承载限度(38.7 kb,~野生型HAd5基因组长度36 kb的108%)的载体。超过该范围,超出的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉,导致包装出来的腺病毒颗粒含有不完整的genome。此外,对于如下载体,我们同样不能保证滴度:

  • 包含对包装过程有不利影响的序列,例如毒性基因(如促凋亡基因);破坏包装细胞或病毒的完整性(如导致细胞聚集的膜蛋白)的基因 ;易于重排或者产生二级结构的序列(如重复序列或者高GC含量序列)。
  • ⽤户提供的载体,因为我们无法控制载体质量。
客户提供载体

如需客户提供腺病毒载体,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

交付周期

周期是指订单接受到发货之间的时间。不包括需要客户提供任何物料(如病毒载体)的等待时间。

视频

暂无

文档

使用说明书

腺病毒体外应用

腺病毒体内应用

COA

您可以在我们的产品标签或包装上找到产品批号。

常见问题解答
慢病毒 MMLV 腺病毒 AAV
组织嗜性 广泛 广泛 hAd5只感染表达CAR受体的细胞 取决于血清型
是否可感染非分裂细胞
病毒基因组稳定整合抑或游离于宿主基因组 稳定整合 稳定整合 游离的DNA附加体形式 游离的DNA附加体形式
滴度 中等 非常高
自定义启动子
应用 细胞培养和体内实验 细胞培养和体内实验 体内实验 体内实验
体内免疫反应 非常低

对于腺病毒,我们测量的是功效滴度(Functional titer)。在293A细胞中转导梯度稀释的腺病毒后,我们使用我们采用基于免疫化学的方法对转导成功的细胞进行计数来代表病毒滴度。这些细胞包含了腺病毒特异性六连体蛋白(Ad5 hexon protein),并且每个细胞被看作一个感染单位。细胞在非常低的感染复数的条件下被转导,以保证每个细胞只被一个腺病毒感染。这种实验方法与传统的噬菌斑试验有良好的相关性。对于超纯化的腺病毒,我们通过测定病毒颗粒的光密度(OD260)来换算为滴度(光密度与病毒的功效滴度有良好的相关性)。