腺相关病毒包装
腺相关病毒(Adeno-associated virus,简称AAV)是一种对人类没有致病性的细小病毒(Parvovirus)。虽然AAV感染在人类中很常见,但与任何已知疾病无关,加上其转导分裂细胞和静止细胞的能力、非常低的免疫原性以及转基因长期表达(与野生型AAV病毒感染后整合到宿主细胞DNA不同,重组AAV载体主要作为染色体外游离体长期存在)。这些特性使AAV成为炙手可热的用于基因治疗的病毒载体。我们开发出一系列专有技术和试剂,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺相关病毒包装工艺水平。
订购信息
病毒类型
我们提供ssAAV(single-stranded AAV)和scAAV(self-complementary AAV)的包装服务,并涵盖以下血清型:
血清型 | 组织嗜性 |
AAV1 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜, 内耳组织, 胰腺, 心脏, 肝 |
AAV2 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肝, 肾, 视网膜, 内耳组织 |
AAV3 | 平滑肌, 肝, 肺 |
AAV4 | 中枢神经系统, 视网膜, 肺, 肾 |
AAV5 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜 |
AAV6 | 平滑肌, 心脏, 肺, 脂肪组织, 肝 |
AAV6.2 | 肺, 肝, 内耳组织 |
AAV7 | 平滑肌, 视网膜, 中枢神经系统, 肝 |
AAV8 | 平滑肌, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 肝, 胰腺, 心脏, 肾, 脂肪组织 |
AAV9 | 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 睾丸, 肾 |
AAVrh10 | 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 肾 |
AAV-DJ | 肝, 心脏, 肾, 脾 |
AAV-DJ/8 | 肝, 脑, 脾 |
AAV-PHP.eB | 中枢神经系统 |
AAV-PHP.S | 外周神经系统 |
AAV2-retro | 脊神经 |
AAV2-QuadYF | 上皮细胞 |
AAV2.7m8 | 视网膜, 内耳组织 |
组织 | 推荐使用的AAV血清型 |
平滑肌 | AAV1, AAV2, AAV3, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10 |
中枢神经系统 | AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-PHP.eB |
外周神经系统 | AAV-PHP.S |
脑 | AAV1, AAV2, AAV5, AAV7, AAV8, AAV-DJ/8 |
视网膜 | AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV2.7m8 |
内耳组织 | AAV1, AAV2, AAV6.2, AAV8, AAV9, AAV2.7m8 |
肺 | AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV6.2, AAV9, AAVrh10 |
肝 | AAV1, AAV2, AAV3, AAV6, AAV6.2, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8 |
胰腺 | AAV1, AAV2, AAV6, AAV8, AAV9, AAVrh10 |
心脏 | AAV1, AAV4, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ |
肾 | AAV2, AAV4, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8 |
脂肪组织 | AAV6, AAV8, AAV9 |
睾丸 | AAV2, AAV9 |
脾 | AAV-DJ, AAV-DJ/8 |
脊神经 | AAV2-retro |
上皮细胞 | AAV2-QuadYF |
注意:携带目的基因的转移质粒上的ITR序列来自于AAV2。一般来说,包装不同血清型的AAV,指的是使用不同血清型的衣壳蛋白表达质粒,与携带AAV2 ITR的转移质粒进行包装。
查看不同腺相关病毒血清型病毒衣壳蛋白1(VP1)的氨基酸序列 >>
交付内容
非纯化AAV制备服务 | 纯化AAV制备服务 | |
交付内容 |
定制病毒,按照规格交付:
|
定制病毒,按照规格交付:
|
对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送:
|
对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:
|
|
Polybrene(5 mg/ml,200 ul),赠送 | Polybrene(5 mg/ml,200 ul),赠送 | |
辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:
|
辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:
|
|
病毒重悬液 | PBS缓冲液 | PBS缓冲液 |
运输/存储 | 干冰/-80°C,避免反复冻融 | 干冰/-80°C,避免反复冻融 |
推荐应用 | 体外培养细胞转导 | 体外培养细胞转导、动物体内细胞转导 |
对照病毒
为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:
辅助病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 |
EGFP对照AAV病毒 | pAAV[Exp]-CMV>EGFP:WPRE | VB190926-1395dab | 哺乳动物基因表达AAV病毒(包含Tet-On诱导表达和FLEX条件性表达)、哺乳动物AAV CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达AAV病毒 |
mCherry对照AAV病毒 | pAAV[Exp]-CMV>mCherry | VB151126-10021 | |
Scramble shRNA对照AAV病毒,EGFP荧光 | pAAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA | VB180117-1020znr | 哺乳动物shRNA干扰AAV病毒 |
Scramble shRNA对照AAV病毒,mCherry荧光 | pAAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA | VB171129-1300zqh | |
Scramble miR30-shRNA对照AAV病毒,EGFP荧光 | pAAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE | VB190813-1134mnj | 哺乳动物miR30-shRNA干扰AAV病毒 |
Tet-On EGFP 对照AAV病毒(选购) | pAAV[Tet_on]-TRE>EGFP-CBh>tTS:T2A:rtTA | VB180124-1047fqv | 哺乳动物基因Tet-On诱导表达AAV病毒 |
FLEX-EGFP对照AAV病毒(选购) | pAAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) | VB180820-1044gcq | 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒 |
辅助病毒
为了更好地开展您的实验,我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如,如果定制病毒是一个只含TRE启动子的TetOn慢病毒,则需要一个表达rtTA的辅助病毒,才能进行诱导表达实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示:
辅助病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 |
SaCas9 AAV病毒(选购) | pAAV[Exp]-CMV>saCas9 | VB180125-1089ffa | 哺乳动物gRNA AAV病毒(不含Cas9) |
Cre AAV病毒(选购) | pAAV[Exp]-CMV>Cre | VB171024-1202yau | 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒 |
运输/储存
我们的AAV病毒存储在PBS缓冲液中,并采用干冰运输。收到AAV病毒后,立即放置于-80℃,可保存约一年。若放置于-20℃,则可保存2-3周。融解后的AAV病毒可在4℃保存1-2周。虽然AAV病毒比其他多数病毒稳定(如慢病毒),但是也请避免反复冻融,因为这会导致AAV病毒滴度显著下降。
生产/质控
步骤 | 描述 | 时间 |
Triple-transfection |
我们常规使用的helper-free腺相关病毒包装系统包括1个转移质粒(Transfer plasmid)、1个Rep和Cap表达质粒(Rep-Cap plasmid)和1个辅助质粒(Helper plasmid),其包装过程是将携带目的基因(Gene of Interest, 简称GOI)和ITR序列的转移质粒、表达特定血清型衣壳蛋白的Rep-Cap质粒和编码介导腺相关病毒复制的腺病毒基因(E2、E2A和VA)的辅助质粒共转染HEK293T包装细胞,这个转染过程称为三质粒转染(Triple-transfection)。 | 第1天 |
Supernatant collection |
在细胞里,转导质粒表达包含目的基因(Gene of Interest, GOI)的AAV基因组,Rep-Cap质粒表达特定血清型的AAV衣壳蛋白,辅助质粒表达辅助AAV基因组表达翻译的组分。三者共同作用从而在细胞中生成完整的AAV病毒颗粒。细胞短暂孵育后,根据血清型的不同,收集上清或者细胞裂解液获取病毒颗粒 | 第3天 |
Concentration and purification |
PEG浓缩病毒颗粒。对于超纯化腺相关病毒(体内应用级别),再通过氯化铯(CsCl)密度梯度离心对病毒颗粒进一步纯化和浓缩。 | 第5天 |
Quality Control |
对病毒采用ITR qPCR方法进行滴度测定(Titer determination)、并且还进行微生物检测(Bioburden test,针对细菌、真菌)、支原体检测(Mycoplasma test)等。 若转移载体同时编码一个荧光蛋白,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况(Transduction test)。此外,对于超纯化AAV病毒,我们还可以检测内毒素水平(Endotoxin test)和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度(Virus purity test)。 |
第7天及以后 |
滴度保证
我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ ITR到3’ ITR)小于腺相关病毒承载限度(4.7 kb,~野生型AAV2基因组长度)的载体。超过该范围,超出4.7 kb的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉,导致包装出来的AAV病毒颗粒含有不完整的genome,不仅影响ITR qPCR滴度检测,而且影响转基因表达。此外,对于如下情况,我们同样不能保证滴度:
- 使用血清型4、6和DJ/8的AAV,其滴度是其他血清型的30%-50%。
- 包含对包装过程有不利影响的序列,例如毒性基因(如促凋亡基因);破坏包装细胞或病毒的完整性(如导致细胞聚集的膜蛋白)的基因 ;易于重排或者产生二级结构的序列(如重复序列或者高GC含量序列)。
- ⽤户提供的载体,因为我们无法控制载体质量。
客户提供载体
如需客户提供AAV病毒载体,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。
视频
暂无
文档
使用说明书
COA
您可以在我们的产品标签或包装上找到产品批号。
常见问题解答
慢病毒 | MMLV | 腺病毒 | AAV | |
组织嗜性 | 广泛 | 广泛 | hAd5只感染表达CAR受体的细胞 | 取决于血清型 |
是否可感染非分裂细胞 | 是 | 否 | 是 | 是 |
病毒基因组稳定整合抑或游离于宿主基因组 | 稳定整合 | 稳定整合 | 游离的DNA附加体形式 | 游离的DNA附加体形式 |
滴度 | 高 | 中等 | 非常高 | 高 |
自定义启动子 | 是 | 否 | 是 | 是 |
应用 | 细胞培养和体内实验 | 细胞培养和体内实验 | 体内实验 | 体内实验 |
体内免疫反应 | 低 | 低 | 高 | 非常低 |
我们通过裂解AAV病毒颗粒,然后以qPCR测定裂解产物中的AAV基因组拷贝数(ITR区域的拷贝数)来获取AAV的物理滴度(Physical titer)。其他滴度测定方式如ddPCR、TCID50以选购方式提供。