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腺相关病毒包装
腺相关病毒（Adeno-associated virus，简称AAV）是一种对人类没有致病性的细小病毒（Parvovirus）。虽然AAV感染在人类中很常见，但与任何已知疾病无关，加上其转导分裂细胞和静止细胞的能力、非常低的免疫原性以及转基因长期表达（与野生型AAV病毒感染后整合到宿主细胞DNA不同，重组AAV载体主要作为染色体外游离体长期存在）。这些特性使AAV成为炙手可热的用于基因治疗的病毒载体。我们开发出一系列专有技术和试剂，从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺相关病毒包装工艺水平。
订购信息
病毒类型
我们提供ssAAV（single-stranded AAV）和scAAV（self-complementary AAV）的包装服务，并涵盖以下血清型：
| 血清型 | 组织嗜性 |
| AAV1 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜, 内耳组织, 胰腺, 心脏, 肝 |
| AAV2 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肝, 肾, 视网膜, 内耳组织 |
| AAV3 | 平滑肌, 肝, 肺 |
| AAV4 | 中枢神经系统, 视网膜, 肺, 肾 |
| AAV5 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜 |
| AAV6 | 平滑肌, 心脏, 肺, 脂肪组织, 肝 |
| AAV6.2 | 肺, 肝, 内耳组织 |
| AAV7 | 平滑肌, 视网膜, 中枢神经系统, 肝 |
| AAV8 | 平滑肌, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 肝, 胰腺, 心脏, 肾, 脂肪组织 |
| AAV9 | 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 睾丸, 肾 |
| AAVrh10 | 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 肾 |
| AAV-DJ | 肝, 心脏, 肾, 脾 |
| AAV-DJ/8 | 肝, 脑, 脾 |
| AAV-PHP.eB | 中枢神经系统 |
| AAV-PHP.S | 外周神经系统 |
| AAV2-retro | 脊神经 |
| AAV2-QuadYF | 上皮细胞 |
| AAV2.7m8 | 视网膜, 内耳组织 |
| 组织 | 推荐使用的AAV血清型 |
| 平滑肌 | AAV1, AAV2, AAV3, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10 |
| 中枢神经系统 | AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-PHP.eB |
| 外周神经系统 | AAV-PHP.S |
| 脑 | AAV1, AAV2, AAV5, AAV7, AAV8, AAV-DJ/8 |
| 视网膜 | AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV2.7m8 |
| 内耳组织 | AAV1, AAV2, AAV6.2, AAV8, AAV9, AAV2.7m8 |
| 肺 | AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV6.2, AAV9, AAVrh10 |
| 肝 | AAV1, AAV2, AAV3, AAV6, AAV6.2, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8 |
| 胰腺 | AAV1, AAV2, AAV6, AAV8, AAV9, AAVrh10 |
| 心脏 | AAV1, AAV4, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ |
| 肾 | AAV2, AAV4, AAV8, AAV9, AAVrh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8 |
| 脂肪组织 | AAV6, AAV8, AAV9 |
| 睾丸 | AAV2, AAV9 |
| 脾 | AAV-DJ, AAV-DJ/8 |
| 脊神经 | AAV2-retro |
| 上皮细胞 | AAV2-QuadYF |
注意：携带目的基因的转移质粒上的ITR序列来自于AAV2。一般来说，包装不同血清型的AAV，指的是使用不同血清型的衣壳蛋白表达质粒，与携带AAV2 ITR的转移质粒进行包装。
查看不同腺相关病毒血清型病毒衣壳蛋白1（VP1）的氨基酸序列 >>
交付内容
| 非纯化AAV制备服务 | 纯化AAV制备服务 | |
| 交付内容 |
定制病毒，按照规格交付：
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定制病毒，按照规格交付：
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对照病毒，按照定制病毒的规格对应赠送：
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对照病毒，按照定制病毒的规格对应选购：
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| Polybrene（5 mg/ml，200 ul），赠送 | Polybrene（5 mg/ml，200 ul），赠送 | |
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辅助病毒，按照定制病毒的规格对应选购：
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辅助病毒，按照定制病毒的规格对应选购：
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| 病毒重悬液 | PBS缓冲液 | PBS缓冲液 |
| 运输/存储 | 干冰/-80°C，避免反复冻融 | 干冰/-80°C，避免反复冻融 |
| 推荐应用 | 体外培养细胞转导 | 体外培养细胞转导、动物体内细胞转导 |
对照病毒
为了更好地开展您的实验，我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如，如果定制病毒表达一个基因，则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA，则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示：
| 辅助病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 |
| EGFP对照AAV病毒 | pAAV[Exp]-CMV>EGFP:WPRE | VB190926-1395dab | 哺乳动物基因表达AAV病毒（包含Tet-On诱导表达和FLEX条件性表达）、哺乳动物AAV CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达AAV病毒 |
| mCherry对照AAV病毒 | pAAV[Exp]-CMV>mCherry | VB151126-10021 | |
| Scramble shRNA对照AAV病毒，EGFP荧光 | pAAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA | VB180117-1020znr | 哺乳动物shRNA干扰AAV病毒 |
| Scramble shRNA对照AAV病毒，mCherry荧光 | pAAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA | VB171129-1300zqh | |
| Scramble miR30-shRNA对照AAV病毒，EGFP荧光 | pAAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE | VB190813-1134mnj | 哺乳动物miR30-shRNA干扰AAV病毒 |
| Tet-On EGFP 对照AAV病毒（选购） | pAAV[Tet_on]-TRE>EGFP-CBh>tTS:T2A:rtTA | VB180124-1047fqv | 哺乳动物基因Tet-On诱导表达AAV病毒 |
| FLEX-EGFP对照AAV病毒（选购） | pAAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) | VB180820-1044gcq | 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒 |
辅助病毒
为了更好地开展您的实验，我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如，如果定制病毒是一个只含TRE启动子的TetOn慢病毒，则需要一个表达rtTA的辅助病毒，才能进行诱导表达实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示：
| 辅助病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 |
| SaCas9 AAV病毒（选购） | pAAV[Exp]-CMV>saCas9 | VB180125-1089ffa | 哺乳动物gRNA AAV病毒（不含Cas9） |
| Cre AAV病毒（选购） | pAAV[Exp]-CMV>Cre | VB171024-1202yau | 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒 |
运输/储存
我们的AAV病毒存储在PBS缓冲液中，并采用干冰运输。收到AAV病毒后，立即放置于-80℃，可保存约一年。若放置于-20℃，则可保存2-3周。融解后的AAV病毒可在4℃保存1-2周。虽然AAV病毒比其他多数病毒稳定（如慢病毒），但是也请避免反复冻融，因为这会导致AAV病毒滴度显著下降。
生产/质控
| 步骤 | 描述 | 时间 |
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Triple-transfection |
我们常规使用的helper-free腺相关病毒包装系统包括1个转移质粒（Transfer plasmid）、1个Rep和Cap表达质粒（Rep-Cap plasmid）和1个辅助质粒（Helper plasmid），其包装过程是将携带目的基因（Gene of Interest， 简称GOI）和ITR序列的转移质粒、表达特定血清型衣壳蛋白的Rep-Cap质粒和编码介导腺相关病毒复制的腺病毒基因（E2、E2A和VA）的辅助质粒共转染HEK293T包装细胞，这个转染过程称为三质粒转染（Triple-transfection）。 | 第1天 |
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Supernatant collection |
在细胞里，转导质粒表达包含目的基因（Gene of Interest, GOI）的AAV基因组，Rep-Cap质粒表达特定血清型的AAV衣壳蛋白，辅助质粒表达辅助AAV基因组表达翻译的组分。三者共同作用从而在细胞中生成完整的AAV病毒颗粒。细胞短暂孵育后，根据血清型的不同，收集上清或者细胞裂解液获取病毒颗粒 | 第3天 |
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Concentration and purification |
PEG浓缩病毒颗粒。对于超纯化腺相关病毒（体内应用级别），再通过氯化铯（CsCl）密度梯度离心对病毒颗粒进一步纯化和浓缩。 | 第5天 |
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Quality Control |
对病毒采用ITR qPCR方法进行滴度测定（Titer determination）、并且还进行微生物检测（Bioburden test，针对细菌、真菌）、支原体检测（Mycoplasma test）等。 若转移载体同时编码一个荧光蛋白，我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况（Transduction test）。此外，对于超纯化AAV病毒，我们还可以检测内毒素水平（Endotoxin test）和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度（Virus purity test）。 |
第7天及以后 |
滴度保证
我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域（从5’ ITR到3’ ITR）小于腺相关病毒承载限度（4.7 kb，～野生型AAV2基因组长度）的载体。超过该范围，超出4.7 kb的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉，导致包装出来的AAV病毒颗粒含有不完整的genome，不仅影响ITR qPCR滴度检测，而且影响转基因表达。此外，对于如下情况，我们同样不能保证滴度：
- 使用血清型4、6和DJ/8的AAV，其滴度是其他血清型的30%-50%。
- 包含对包装过程有不利影响的序列，例如毒性基因（如促凋亡基因）；破坏包装细胞或病毒的完整性（如导致细胞聚集的膜蛋白）的基因 ；易于重排或者产生二级结构的序列（如重复序列或者高GC含量序列）。
- ⽤户提供的载体，因为我们无法控制载体质量。
客户提供载体
如需客户提供AAV病毒载体，则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测，每一份材料附加检测费用。请注意，客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。
视频
暂无
文档
使用说明书
COA
您可以在我们的产品标签或包装上找到产品批号。
常见问题解答
| 慢病毒 | MMLV | 腺病毒 | AAV | |
| 组织嗜性 | 广泛 | 广泛 | hAd5只感染表达CAR受体的细胞 | 取决于血清型 |
| 是否可感染非分裂细胞 | 是 | 否 | 是 | 是 |
| 病毒基因组稳定整合抑或游离于宿主基因组 | 稳定整合 | 稳定整合 | 游离的DNA附加体形式 | 游离的DNA附加体形式 |
| 滴度 | 高 | 中等 | 非常高 | 高 |
| 自定义启动子 | 是 | 否 | 是 | 是 |
| 应用 | 细胞培养和体内实验 | 细胞培养和体内实验 | 体内实验 | 体内实验 |
| 体内免疫反应 | 低 | 低 | 高 | 非常低 |
我们通过裂解AAV病毒颗粒，然后以qPCR测定裂解产物中的AAV基因组拷贝数（ITR区域的拷贝数）来获取AAV的物理滴度（Physical titer）。其他滴度测定方式如ddPCR、TCID50以选购方式提供。