VSV病毒包装

水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)载体在研究病毒颗粒入侵宿主细胞、辨认介导病毒感染细胞的细胞表面受体、筛选抑制病毒药物以及疫苗开发方面有着广泛的应用。VSV病毒载体可以高效地利用非同源的病毒蛋白进行假型化(presudotypted),例如要求使用高生物安全等级的病毒包膜蛋白,因此VSV也是研究高风险病毒细胞侵入机制的理想选择。 载体家开发了一系列先进的技术和试剂,大为改进了重组VSV包装的滴度、纯度、可靠性和稳定性,特别是结合了我们的VSV载体克隆系统。

订购信息
病毒类型
  • VSV-G膜蛋白覆盖的VSV病毒
  • 使用其他膜蛋白进行假病毒化的VSV病毒(如使用冠状病毒刺突蛋白)
  • 无膜蛋白的表面光秃的VSV病毒(可用于阴性对照)
交付内容
非纯化VSV制备服务 纯化VSV制备服务
交付内容

定制病毒,按照规格交付:

  • 中量制备:>108PFU/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>109PFU/ml,10 x 100 ul

定制病毒,按照规格交付:

  • 中量制备:>108PFU/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>109PFU/ml,10 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送:

  • 中量制备:>108PFU/ml,2 x 100 ul
  • ⼤量制备:>108PFU/ml,2 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • 中量制备:>108PFU/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>109PFU/ml,10 x 100 ul
Polybrene(5 mg/ml,200 ul),赠送 Polybrene(5 mg/ml,200 ul),赠送
病毒重悬液 HBSS缓冲液 HBSS缓冲液
运输/存储 干冰/-80°C,避免反复冻融 干冰/-80°C,避免反复冻融
推荐应用 体外培养细胞转导 体外培养细胞转导、动物体内细胞转导

对照病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:

对照病毒 对照载体名称 对照载体ID 定制病毒
EGFP对照VSV病毒 pVSV[Exp]-EGFP VB010000-9315gcp 哺乳动物基因表达VSV病毒
运输/储存

我们的VSV病毒存储在HBSS缓冲液中,并采用干冰运输。收到VSV病毒后,请立即放置于-80℃,长期贮存至少6个月。VSV病毒的保质期约为一年。请避免反复冻融,因为这会导致慢病毒滴度大幅下降。

生产/质控
步骤 描述 时间

Primary recovery of VSV from plasmid

VSV包装使用VSV-ΔG转移质粒,该质粒不表达G糖蛋白,但是携带有目的基因,包装时连同四个辅助质粒共同转染包装细胞。四个辅助质粒分别表达VSV N、P、G和L蛋白。包装细胞则经过重组牛痘细胞转导,表达T7 RNA聚合酶。 第1天

Generation of G-complemented VSV

收集细胞上清,再次加入转染了VSV-G糖蛋白表达质粒的细胞,从而扩增出表面具有G糖蛋白覆盖,但是基因组不含G糖蛋白基因的VSV病毒 (G-complemented VSV)。 第3天

Plaque purification

收集上清后进行噬斑试验,进一步筛选出有感染活性的病毒。浓缩并测定病毒滴度,初步获得少量的VSV病毒。 第6天

Pseudotyping VSV with viral envelop protein

分离出单个噬斑的细胞上清,然后连同表包膜蛋白的辅助质粒转导BHK-21包装细胞,从而对VSV病毒扩大生产。

而对于制备VSV假病毒,此时转导的包装细胞是表达异源性病毒膜蛋白的 ,并同时加入了G糖蛋白中和抗体。

第10天

Sucrose gradient purification

收集上清,蔗糖密度梯度离心法浓缩纯化 第15天

Quality control

对于载体家生产的每一个重组VSV病毒,质量控制包括噬斑滴度检测、无菌测试、支原体检测等。如果VSV病毒载体表达荧光蛋白,则我们会进行荧光转导测试。如果VSV病毒载体含有药筛标记,我们也会在转导测试后伴随进行药筛测试。此外,对于超纯化VSV,我们会进行内毒素检测。 第17天及以后

试验验证

我们开发了一系列技术用以优化我们的VSV包装流程。经优化后我们的病毒展现出对比已公开的方案具备更高的转导效率(图1)。

Figure 1

图1 VSV-G糖蛋白覆盖的VSV转导BHK-21细胞。转导前与转导后24小时分别拍摄。倍数:100x。左:白光。右:GFP。

此外,我们针对新冠S蛋白(及其D614G突变体)VSV假病毒进行大量的试验验证。结果表明新冠S蛋白(及其D614G突变体)VSV假病毒可以有效转导高表达hACE2的BHK-21细胞,但较难转导低水平表达hACE2的BHK-21细胞(图2)。因此我们推荐使用我们的ACE2表达细胞株进行新冠S蛋白假病毒或VSV-G假病毒的转导实验。

Figure 2

图2 新冠S蛋白假病毒VSV转导BHK-21和BHK-21-ACE2细胞

视频

暂无

文档

暂无

COA

您可以在我们的产品标签或包装上找到产品批号。

常见问题解答

我们使用噬斑试验测定VSV病毒滴度。简单来说,即是对单层的易感细胞进行病毒转导,并在培养皿中覆盖一层琼脂以限制病毒的扩散。每个被感染的细胞都将裂解并进一步造成其周边接触的细胞被感染,最终在培养皿上形成一个噬斑。每个噬斑来源于一个VSV病毒颗粒,因此可以通过计算噬斑的数量来换算出VSV滴度。

载体家生产的重组VSV病毒是复制缺陷型的,删除了包膜上的G糖蛋白表达基因。我们制备的VSV假病毒使用异源病毒的包膜蛋白,包括一些来源于需要被高度隔离的病毒类型。重组VSV不能进行额外的复制,在BSL2等级的实验室中也能操作。因此我们生产的重组VSV特别适合用于在普通实验室研究高风险性病毒的由其包膜蛋白介导的细胞感染机制。

交付周期是指订单接收到发货之间的时间,不包括需要客户提供任何物料(如病毒载体)的等待时间。