进一步了解 >> 我们的质量体系通过ISO 9001认证。这些产品是在我们先进的设施中严格控制下生成的。

重组蛋白表达纯化

载体家提供多种平台表达重组蛋白,包括细菌、酵母、哺乳动物细胞和昆虫细胞等表达系统,可广泛满足蛋白研究、蛋白酶制备、药物开发、医学诊断与生物工程等领域的需求。我们的生产流程经过高度优化,以重组蛋白表达载体构建为起始,最终可以表达并纯化出高质量的重组蛋白。我们也可以根据客户提供的载体进行重组蛋白表达。

订购信息
重组蛋白表达系统 服务项目 交付内容 产量 价格(CNY) 周期
细菌
(E. coli)
蛋白小试表达与筛选 纯化的蛋白
蛋白表达纯化报告
>1 mg,85%纯度 ¥22,000起 10-12周 订购咨询
蛋白大量表达与纯化(至高20 L体系)
酵母
(S. cerevisiae)
蛋白小试表达与筛选 纯化的蛋白
蛋白表达纯化报告
>1 mg,85%纯度 订购咨询 根据项目进行评估 订购咨询
蛋白大量表达与纯化(至高20 L体系)
哺乳动物细胞(293T) 蛋白小试表达与筛选 纯化的蛋白
蛋白表达纯化报告
1-100 mg/L,85%纯度 ¥32,000起 15-22周 订购咨询
蛋白大量表达与纯化(至高1 L体系)
昆虫细胞
(Sf9)
蛋白小试表达与筛选 纯化的蛋白
蛋白表达纯化报告
1-150 mg/L,85%纯度 订购咨询 根据项目进行评估 订购咨询
蛋白大量表达与纯化(至高1 L体系)

额外服务

服务项目 价格(CNY) 周期
内毒素检测与去除 (<1.0 EU/mg) ¥1,000/次 5-7天 订购咨询
蛋白标签去除 (即His、MBP、GST) ¥1,000/次 5-7天 订购咨询

注意事项

1. 纯化的蛋白默认以含50%甘油的PBS缓冲液保存,若需要改变贮存体系请进一步咨询。

2. Western-Blot:我们的的实验报告包含使用常规标签如His、MBP、GST的蛋白WB服务。若您表达的蛋白不带有常规标签,则需要您提供相关的抗体进行实验。

3. 分子量:我们只提供分子量大小在10 -200 kDa的重组蛋白表达服务。

4. 包涵体:包涵体形式的蛋白将增加复性相关费用并延长交付时间14天。

5. 膜蛋白:一般情况下我们不提供膜蛋白表达服务。

6. 风险:由于蛋白质结构和功能的复杂性,重组蛋白表达实验具有探索性质。若因目的基因自身属性造成的蛋白表达失败,我们仍将按照总报价的50%收取劳务费用。

蛋白表达系统类型
  • 细菌
  • 酵母
  • 哺乳动物细胞
  • 昆虫细胞
亮点
  • 高度综合性的重组蛋白表达纯化平台,可灵活选择不同表达系统以满足各种研究需求
  • 在表达酶、细胞因子、细胞受体和抗体方面具有丰富的实战经验
  • 从载体设计到蛋白表达纯化的一站式服务
  • 丰富的蛋白标签可供选择
  • 多种纯化方式可供选择,包括色谱法和基于过滤机制的纯化技术
  • 根据需求可选额外的纯化服务(如透析、促溶、去内毒素、除菌、冻干等)
生产与质控

细菌表达系统

大肠杆菌(E. coli)是迄今被使用最为广泛的蛋白表达系统,拥有周期短、技术简单、易于放大以及低成本等优点。载体家高度优化的大肠杆菌蛋白表达系统可以有效表达胞内、周质内以及可溶和难溶蛋白。此外我们也可以根据需求使用枯草芽孢杆菌(B. subtilis)进行重组蛋白表达。

一个典型的大肠杆菌重组蛋白表达流程从构建含有融合蛋白基因的载体开始,这其中经过标签筛选、密码子优化等步骤。该载体随后被转化至宿主菌进行小试表达。根据小试表达效果,我们可以进一步放大体系至大规模发酵规模,然后经过一系列分离纯化步骤获得大量重组蛋白。

E. coli重组蛋白表达流程

图1. E. coli重组蛋白表达流程

酵母表达系统

酵母适用于表达真核生物重组蛋白。酵母提供的基本的翻译后修饰环境有助于真核生物蛋白保持它们的基本功能(一些治疗性蛋白必须被合适地糖基化修饰,以避免引发免疫系统反应),同时相对于其他真核蛋白表达系统成本更低。酵母表达系统还具有快速表达、易于放大、技术简单等优点。载体家高度深入优化酿酒酵母(S. cerevisiae)表达系统,可以高效表达胞内和分泌型蛋白。此外,根据需求我们也能在毕赤酵母 (P. pastoris)中表达重组蛋白。

一个典型的酵母重组蛋白表达流程从构建含有融合蛋白基因的载体开始,这其中经过标签筛选、密码子优化等步骤。该载体随后被电转至合适的酵母菌株,并筛选出高产量的克隆。在大量表达纯化之前,我们会先进行小试表达和优化,以获得最佳的表达条件。

酵母重组蛋白表达流程

图2. 酵母重组蛋白表达流程

哺乳动物细胞表达系统

使用哺乳动物细胞表达重组蛋白可以为蛋白带来完整的翻译后修饰与严谨的折叠结果,因此是生产治疗性蛋白、疫苗和抗体的理想方法。经过我们高度优化,我们瞬转293T细胞的方式可以高效表达真核生物蛋白。

哺乳动物细胞重组蛋白表达从构建含有目的基因的表达载体开始,这其中经过标签筛选、密码子优化等步骤。该载体随后被转染至293T细胞。在大量表达纯化之前,我们会先进行小试表达和优化,以获得最佳的表达条件。

哺乳动物细胞重组蛋白表达流程

图3. 哺乳动物细胞重组蛋白表达流程

昆虫细胞表达系统

利用杆状病毒感染高密度的昆虫细胞表达目的基因是另一种广泛应用的真核生物重组蛋白表达方法,可以为蛋白提供良好的翻译后修饰和折叠环境。昆虫细胞表达系统常用于激酶和类固醇受体的生产,而在细菌细胞中这些蛋白由于未被磷酸化和错误折叠而丧失功能。经过我们高度优化,我们使用的Sf9细胞可以高效表达胞内或分泌型真核生物蛋白。

昆虫细胞重组蛋白表达从构建杆状病毒转移载体开始,这其中经过融合标签筛选、纯化标签选择、密码子优化等步骤。该载体随后被用于杆粒的制备。重组杆粒被转导至昆虫细胞并扩增杆状病毒。在大量表达纯化之前,我们会先进行小试表达和优化,以获得最佳的表达条件。

昆虫细胞重组蛋白表达流程

图4. 昆虫细胞重组蛋白表达流程

运输/储存

我们的重组蛋白保存于特定的缓冲液中并通过干冰形式运输。接收到货物后,重组蛋白一般可放置于-80℃长期保存(可稳定保存至少1年)。请勿反复冻融,否则将影响蛋白的结构和性能。

客户提供材料

如果客户提供实验材料,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。

视频

蛋白小试表达

文档

蛋白小试表达报告模板

COA

您可以在我们的产品标签或包装上找到产品批号。

常见问题解答

每一种重组蛋白表达系统均有其特定的优势和不足,只有恰当选择才能最好地满足项目需求。下表列出了每种系统的优缺点:

重组蛋白表达系统 优势 不足
细菌
  • 高性价比
  • 周期短
  • 技术简单
  • 容易规模化放大
  • 高产量
  • 缺乏翻译后修饰
  • 使用的密码子与真核生物不同
  • 一些蛋白由于溶解度的问题而难以表达
  • 有可能产生包涵体,为蛋白纯化制造困难
  • 一些蛋白对细菌生长有毒性
酵母
  • 高性价比
  • 周期短
  • 技术简单
  • 容易规模化放大
  • 高产量
  • 具备一定的翻译后修饰环境,如提供N-糖基化修饰、磷酸化修饰
  • 适合分泌型和胞内蛋白表达
  • 蛋白超糖基化
  • 糖基化模式与高等真核生物有差异
  • 在N-多糖结构中引入大量甘露糖
哺乳动物细胞
  • 为真核生物蛋白生产提供最佳的翻译后修饰和折叠环境
  • 可用于表达分泌型蛋白和膜蛋白
  • 适合治疗性蛋白的生产
  • 高成本
  • 周期长
  • 苛刻的培养条件
  • 较难放大生产
  • 胞内蛋白表达产量较低
昆虫细胞
  • 为复合物型的蛋白提供翻译后修饰和折叠环境
  • 适合分泌型、胞内和膜蛋白的表达
  • 可用于表达大的蛋白复合物
  • 高水平表达真核生物蛋白
  • 在高密度的细胞中生产,易于放大
  • 极高的生产成本
  • 周期长
  • 苛刻的培养条件
  • 技术复杂

以下是几种常见原因:

质粒没有被转化至合适的宿主菌

当质粒没有被转化至合适的宿主菌进行诱导将导致重组蛋白不表达。载体家制备的载体大多数以VB UltrastableTM菌株为宿主菌,该菌株可以为质粒在细菌中保持其良好的稳定性,但是不适合进行重组蛋白表达。例如利用pET载体通过IPTG诱导表达重组蛋白,VB UltrastableTM菌株缺少其所需要的T7 RNA聚合酶。通常用于表达重组蛋白的宿主菌应为BL(DE3)。

重组蛋白不适合从质粒载体上直接表达

一些情况下,表达的重组蛋白是不可溶的、错误折叠的、被不恰当剪切的、或者对宿主菌有毒性的,这些情况将导致很低的蛋白产量。对此通常需要优化您的诱导表达条件、使用更具容忍度的宿主或更换表达载体。

诱导表达条件未经恰当优化

根据表达的基因、表达载体和宿主菌的不同,您需要为您的诱导表达条件考虑以下几点:OD600值(通常为0.6-0.8);诱导物浓度(IPTG或L-阿拉伯糖)不能过高或者过低;诱导时间不能过长或过短;诱导温度,特别是对于某些容易产生表达问题的蛋白,需要尝试用不同的温度(如16℃、25℃、30℃、37℃等)进行诱导表达。极少情况下,由于未知原因,同一个表达载体的不同克隆可能表现出不同的诱导表达效果,因此您需要筛选足够的克隆进行测试以获得表现最佳的克隆。 表达重组蛋白时为了避免陷入以上的境况并花费大量宝贵的时间,我们建议您将诱导表达条件的优化交由载体家处理。