- 腺相关病毒
- AAV衣壳定向进化
- CRISPR/shRNA文库构建
- 体外转录服务
- 细胞稳转株构建
- shRNA(3+1)套装
- shRNA基因敲低解决方案
- CRISPR基因编辑解决方案
- 基因诱导表达解决方案
- AAV血清型彩虹装
- 特异性启动子AAV
- AAV类病毒颗粒(VLP)
- 现货IVT mRNA
- shRNA慢病毒文库
- Dual-gRNA慢病毒文库
- 对照/辅助载体
- VB UltraStable™ 化学感受态细胞
冠状病毒解决方案
云舟生物提供可应用于体外和体内实验的现货IVT mRNA。我们的mRNA经过验证,无论在体外细胞抑或动物模型中均能高水平表达报告基因,因此可用于验证mRNA递送效率或者作为您的mRNA实验的对照组。更多定制mRNA的制备服务,请参照mRNA基因递送解决方案。
亮点
运输与保存
我们的mRNA产品存储于1 mM柠檬酸钠缓冲液(pH 6.4),并以干冰形式发货。mRNA可在-80℃下保存12个月。请避免反复冻融mRNA。
IVT mRNA制备与质量控制
图1 体外转录合成mRNA的典型流程
我们的IVT mRNA制备首先从设计和合成模版DNA序列开始,并考虑一系列因素如密码子选择、GC含量、热力学稳定性、RNA二级结构 等,然后将其克隆到体外转录载体中。然后对质粒DNA进行纯化、验证和线性化,然后进行体外转录反应,从而产生所需 的转录本。我们通过引入修饰的核苷酸,有助于改善mRNA的体内的翻译效率并减低免疫反应。我们采用共转录或者酶促 法进行mRNA加帽,效率可达95%以上。经过磁珠纯化后的mRNA还会通过一系列QC验证以保证终产品的质量。
使用说明书
Cap 0是指将N7甲基鸟苷(m7G)以5'至5'三磷酸连接的方式添加到真核mRNA的5’端。这种修饰是通过一系列共转录酶促反应添加的,其功能是调节细胞核输出、转录稳定性,并通过真核翻译起始因子(eIF4E)的识别促进mRNA的翻译。Cap 1是指除了m7G Cap之外,进一步在转录mRNA序列的第一个核苷酸(m7GpppNm)的2' O上添加甲基。在哺乳动物细胞中,Cap 1结构是mRNA被识别为自身而非先天免疫靶向的重要标志。在合成的mRNA中添加Cap 1结构可以增强体内mRNA的表达并降低其免疫原性。
体外转录mRNA的5'帽子可以以加入Cap类似物共转录的方式添加,也可以通过酶促反应在转录后添加。我们提供了两种加帽方式,其效率已通过LC-MS验证表现良好。根据客户首选的加帽方法,我们将从一开始就选择。
细胞包含位于胞质的和内涵体的两类RNA受体,它们在识别外源RNA时将激活免疫反应。修饰核苷酸通常存在于细胞的内源性RNA中。在IVT mRNA中加入某些修饰的核苷酸可降低其免疫原性,改变二级结构,并以序列依赖的方式提高翻译效率和延长半衰期。我们提供了多种类型的修饰核苷酸,包括常用的N1-甲基假尿苷(m1Ψ)和5-甲基胞苷(m5C)。N1-甲基假尿苷和5-甲基胞苷是最早发现的天然来源是 tRNA,然而,它们在mRNA中的功能直到最近才得到重视。尿苷和胞苷的这些甲基化衍生物可以在mRNA IVT和翻译中取代它们使用的默认核苷,而不改变传统的Watson-Crick碱基配对。在mRNA治疗中使用它们的一个主要优势是它们能够帮助RNA规避免疫受体的识别,从而减轻不必要的免疫反应,增强转录稳定性和翻译效率。